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凯特与新世纪杏及其F1代杂种自交亲和与不亲和性差异的分子机理研究

中文摘要第1-13页
英文摘要第13-16页
引言第16-36页
 1 问题的提出第16页
 2 植物自交不亲和性研究进展第16-34页
   ·植物自交不亲和性分类第16-18页
   ·孢子体自交不亲和性研究进展第18-19页
   ·配子体自交不亲和性研究进展第19-28页
     ·罂粟属信号介导的自交不亲和性研究进展第19-20页
     ·S-RNase 系统 SI 的雌蕊 S-基因研究进展第20-24页
     ·S-RNase 系统 SI 的花粉 S-基因研究进展第24-28页
   ·与自交不亲和相关的非 S-因子研究进展第28-31页
   ·自交不亲和性的起源与进化第31页
   ·蔷薇科果树及杏自交不亲和性研究进展第31-34页
 3 本研究的内容及目标第34-36页
第一章 杏自交不亲和性相关生理特性研究第36-44页
   ·材料与方法第36-38页
     ·试验材料第36页
     ·自交亲和性的田间鉴定第36页
     ·花粉采集及发芽力的测定第36页
     ·荧光显微镜观察花粉管生长第36-37页
     ·可溶性蛋白含量的测定第37页
     ·制作 BSA 蛋白含量标准曲线图和测定花柱可溶蛋白含量第37页
     ·花柱 RNA 酶酶活力检测第37-38页
   ·结果与分析第38-41页
     ·自花授粉坐果率调查第38-39页
     ·花粉发芽率第39页
     ·荧光显微镜观察花粉萌发和花粉管生长状况第39-40页
     ·气球期花柱蛋白含量第40-41页
     ·气球期花柱蛋白 RNA 酶比活力第41页
   ·讨论第41-42页
     ·RNA 酶比活力与花粉管生长的关系第41-42页
     ·花柱中 RNase 活性与自交不亲和性第42页
   ·结论第42-44页
第二章 自交不亲和性相关S-RNase 基因的检测及表达第44-59页
   ·材料与方法第44-48页
     ·试验材料第44页
     ·基因组DNA 提取第44页
     ·花柱RNA 的提取第44-45页
     ·S-等位基因专一性PCR 扩增第45-46页
     ·S-RNase 基因特异片段的克隆及序列分析第46-48页
       ·连接反应第46页
       ·大肠杆菌感受态细胞的制备第46-47页
       ·大肠杆菌感受态细胞的转化及阳性克隆的筛选测序第47页
       ·序列分析第47-48页
     ·实时荧光定量RT-PCR第48页
   ·结果与分析第48-55页
     ·凯特与新世纪S-RNase 基因的检测第48-49页
     ·凯特与新世纪S-RNase 基因的RT-PCR 检测第49页
     ·凯特、新世纪S-RNase 基因的核苷酸序列第49-50页
     ·检测的新 S-RNase 基因推导的氨基酸序列及与已知的蔷薇科李属 S-RNase 基因的进化关系第50-53页
     ·杏 S-RNase 基因在不同发育阶段转录水平表达特性第53-54页
     ·S-RNase 基因在花柱各部位转录表达特性第54页
     ·授粉对S-RNase 基因转录表达的影响第54-55页
   ·讨论第55-58页
     ·关于杏S-RNase 基因的特异引物第55页
     ·关于凯特 S-RNase 杏一条带的问题第55-56页
     ·凯特、新世纪 S-RNase 基因的序列特征第56页
     ·关于蔷薇科果树 S-RNase 基因的系统进化第56页
     ·实时荧光定量PCR技术与S-RNase基因的表达第56-57页
     ·关于自交亲和与不亲和杏 S-RNase 基因的表达模式第57页
     ·授粉对自交不亲和性 S-RNase 基因转录水平表达模式的影响第57-58页
   ·结论第58-59页
第三章 杏杂种 F1代自交不亲和性差异的分子机理研究第59-79页
   ·材料与方法第59-62页
     ·试验材料第59页
     ·基因组 DNA 提取第59页
     ·花柱RNA 的提取第59页
     ·S-等位基因专一性 PCR 扩增第59页
     ·S-RNase 基因特异片段的克隆及序列分析第59-60页
     ·实时荧光定量 RT-PCR第60页
     ·花柱蛋白的提取第60页
     ·双向电泳及图像分析第60-61页
     ·差异蛋白质点的酶解第61页
     ·差异蛋白质点的鉴定第61-62页
   ·结果与分析第62-73页
     ·杏杂种F1 代S 基因型的鉴定第62页
     ·凯特、新世纪及6 株F1 代S 基因m RNA 表达量的实时检测第62-64页
     ·完全自交不亲和杏29 号自花与异花授粉后花柱蛋白质组比较第64-67页
     ·完全自交不亲和杏29 号与自交亲和杏23 号自花授粉后花柱蛋白质组比较第67-71页
     ·杏杂种29 号、23 号亲和与不亲和授粉后 S-RNase 表达量比较第71-72页
     ·杏亲和与不亲和授粉后雌蕊差异蛋白质分析第72-73页
   ·讨论第73-76页
     ·S-基因转录表达量与自交不亲和性的相关性第73页
     ·蛋白质组水平研究自交不亲和性的意义第73-74页
     ·LC-ESI-MS/MS 检测差异蛋白的局限性第74页
     ·鉴定的点表观分子量、等电点与理论计算值的偏差第74页
     ·可能与自交不亲和性相关的差异蛋白.第74-75页
     ·其它差异蛋白在自交不亲和反应中可能的功能第75-76页
   ·结论第76-79页
小结第79-82页
 1 本论文的主要结论第79-80页
 2 本论文的主要创新点第80-81页
 3 下一步的工作设想第81-82页
参考文献第82-101页
附录第101-104页
致谢第104-105页
攻读博士期间发表的论文第105-106页

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