| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-9页 |
| 第一章 综述 | 第9-21页 |
| 1 文昌鱼背景介绍 | 第9页 |
| 2 SRA基因的研究现状 | 第9-18页 |
| ·类固醇激素受体 | 第9-11页 |
| ·SRA基因的发现 | 第11-12页 |
| ·SRA基因的作用对象 | 第12-13页 |
| ·SRA基因与受体作用部位 | 第13-14页 |
| ·SRA的功能 | 第14-18页 |
| ·RNA形式的功能 | 第14-16页 |
| ·SRA蛋白质形式的功能 | 第16-18页 |
| 3 主要内容、研究意义及技术路线 | 第18-21页 |
| 第二章 青岛文昌鱼SRA基因的克隆及生物信息学分析 | 第21-48页 |
| 1 前言 | 第21-23页 |
| 2 试验材料 | 第23-25页 |
| ·成体文昌鱼 | 第23页 |
| ·质粒和菌株 | 第23页 |
| ·试剂及溶液 | 第23-25页 |
| ·试剂 | 第23-24页 |
| ·培养基 | 第24-25页 |
| ·试验用主要仪器 | 第25页 |
| 3 试验方法 | 第25-38页 |
| ·总RNA的提取 | 第25-26页 |
| ·一步法提取成体文昌鱼总RNA | 第25-26页 |
| ·甲醛变性胶电泳检测提取的RNA | 第26页 |
| ·RACE扩增青岛文昌鱼SRA基因 | 第26-29页 |
| ·青岛文昌鱼5’-cDNA文库的构建 | 第26-27页 |
| ·青岛文昌鱼SRA基因的基因扩增 | 第27-29页 |
| ·PCR片段的纯化 | 第29页 |
| ·青岛文昌鱼SRA基因的克隆和测序 | 第29-32页 |
| ·连接反应 | 第29-30页 |
| ·大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备 | 第30页 |
| ·热激转化 | 第30-31页 |
| ·筛选阳性克隆及测序 | 第31-32页 |
| ·基因组扩增青岛文昌鱼SRA基因 | 第32-33页 |
| ·文昌鱼基因组的提取 | 第32页 |
| ·文昌鱼SRA基因的基因组扩增 | 第32-33页 |
| ·载体pcDNA3.0-SRA的构建 | 第33-35页 |
| ·提取载体pcDNA3.0和目的片段所在载体质粒 | 第33-34页 |
| ·载体pcDNA3.0和目的片段所在载体质粒的双酶切 | 第34-35页 |
| ·Northern blot | 第35-38页 |
| ·DIG标记探针的合成 | 第35-36页 |
| ·RNA探针效率检测 | 第36-37页 |
| ·转膜 | 第37-38页 |
| ·杂交 | 第38页 |
| ·杂交后洗膜及显色 | 第38页 |
| 4 结果 | 第38-46页 |
| ·总RNA的提取 | 第38-39页 |
| ·RACE扩增青岛文昌鱼SRA基因 | 第39-40页 |
| ·青岛文昌鱼SRA基因基因组结构 | 第40-41页 |
| ·青岛文昌鱼SRA基因生物信息学分析 | 第41-44页 |
| ·NCBI BLASTP | 第41-42页 |
| ·CLUSTAL W | 第42-44页 |
| ·青岛文昌鱼SRA基因进化树分析 | 第44页 |
| ·RNA探针的合成和效率检测 | 第44-45页 |
| ·青岛文昌鱼SRA基因Northern blot | 第45-46页 |
| 5 讨论 | 第46-48页 |
| 第三章 青岛文昌鱼基因的原位杂交及时空表达分析 | 第48-56页 |
| 1 前言 | 第48页 |
| 2 试验材料 | 第48-50页 |
| ·成体文昌鱼和胚胎 | 第48页 |
| ·质粒和菌株 | 第48-49页 |
| ·试剂及溶液 | 第49-50页 |
| ·仪器设备 | 第50页 |
| 3 方法 | 第50-52页 |
| ·青岛文昌鱼总RNA提取 | 第50页 |
| ·青岛文昌鱼SRA基因DIG标记探针的合成 | 第50页 |
| ·青岛文昌鱼SRA基因DIG标记探针效率检测 | 第50页 |
| ·石蜡切片 | 第50-51页 |
| ·整体原位杂交 | 第51-52页 |
| ·胚胎原位杂交 | 第52页 |
| 4 结果 | 第52-54页 |
| ·整体原位杂交检测SRA基因在成体各组织中的表达 | 第52-53页 |
| ·整体原位杂交检测SRA基因在文昌鱼胚胎不同发育时期的时空表达 | 第53-54页 |
| 5 讨论 | 第54-56页 |
| 第四章 文昌鱼SRA基因的融合表达及Westenr blot检测 | 第56-64页 |
| 1 前言 | 第56页 |
| 2 试验材料 | 第56-58页 |
| ·质粒和菌株 | 第56-57页 |
| ·试剂及溶液 | 第57页 |
| ·培养基 | 第57页 |
| ·主要仪器设备 | 第57-58页 |
| 3 试验方法 | 第58-61页 |
| ·SRA与pET28a载体的双酶切 | 第58-60页 |
| ·青岛文昌鱼SRA基因的引物设计与PCR扩增 | 第58-59页 |
| ·SRA基因PCR产物及表达载体pET-28a的双酶切 | 第59-60页 |
| ·青岛文昌鱼SRA基因的克隆和测序 | 第60页 |
| ·融合蛋白诱导表达 | 第60页 |
| ·重组蛋白Western blotting鉴定 | 第60-61页 |
| ·转膜 | 第60页 |
| ·封闭 | 第60页 |
| ·一抗孵育 | 第60-61页 |
| ·二抗孵育 | 第61页 |
| ·显色 | 第61页 |
| 4 结果 | 第61-62页 |
| ·SDS-PAGE结果 | 第61-62页 |
| ·Western blot结果 | 第62页 |
| 5 讨论 | 第62-64页 |
| 总结与展望 | 第64-66页 |
| 参考文献 | 第66-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 附录 | 第72-74页 |
