| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-13页 |
| 前言 | 第13-17页 |
| 第一章 鸡淋巴细胞趋化因子基因ORF序列的克隆 | 第17-32页 |
| 1.材料和方法 | 第17-26页 |
| ·材料 | 第17-19页 |
| ·主要仪器 | 第17页 |
| ·试验动物和饲料 | 第17-18页 |
| ·菌株、载体 | 第18页 |
| ·分子生物学试剂和试剂盒 | 第18页 |
| ·培养基 | 第18-19页 |
| ·引物 | 第19页 |
| ·鸡脾脏淋巴细胞分离用材料 | 第19页 |
| ·总RNA抽提用材料 | 第19页 |
| ·CaCl_2法转化用材料 | 第19页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳材料 | 第19页 |
| ·方法 | 第19-26页 |
| ·鸡脾脏脾淋巴细胞的分离 | 第19-20页 |
| ·鸡脾脏脾淋巴细胞总RNA的抽提 | 第20页 |
| ·RT-PCR扩增ChLptn基因 | 第20-22页 |
| ·RT-PCR产物的回收纯化 | 第22页 |
| ·RT-PCR产物与pGEM-T-easy的连接 | 第22-23页 |
| ·连接产物转化入E.coli DH5a(CaCl_2法) | 第23页 |
| ·转化克隆的PCR鉴定 | 第23-24页 |
| ·PCR阳性克隆的酶切鉴定 | 第24-26页 |
| ·用E.Z.N.A小量质粒制备试剂盒抽提PCR阳性克隆的质粒 | 第24-25页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第25-26页 |
| ·阳性克隆的序列测定及分析 | 第26页 |
| 2.结果 | 第26-30页 |
| ·ChLptn的RT-PCR扩增结果 | 第26-27页 |
| ·转化菌落的PCR鉴定 | 第27页 |
| ·重组质粒pGEM-T easy-ChLptn的酶切鉴定 | 第27-28页 |
| ·ChLptn基因的序列分析 | 第28-30页 |
| 3.讨论 | 第30-32页 |
| 第二章 ChLpin基因在大肠杆菌的表达 | 第32-46页 |
| 1.材料和方法 | 第32-40页 |
| ·材料 | 第32-34页 |
| ·主要仪器 | 第32页 |
| ·菌株 | 第32页 |
| ·引物 | 第32页 |
| ·常用分子生物学试剂和试剂盒 | 第32-33页 |
| ·常规化学试剂 | 第33页 |
| ·CaCl_2法所需材料 | 第33页 |
| ·培养基 | 第33页 |
| ·SDS-PAGE所需材料 | 第33-34页 |
| ·方法 | 第34-40页 |
| ·ChLptn的ORF的制备 | 第34-36页 |
| ·载体pET-32a(+)的制备 | 第36-37页 |
| ·pET-32a(+)与ChLptn(ORF)的连接 | 第37页 |
| ·用CaCl_2法将连接产物转化入宿主细菌E.coli BL21(DE3) | 第37-38页 |
| ·PCR鉴定转化克隆 | 第38-39页 |
| ·PCR阳性克隆的酶切鉴定 | 第39页 |
| ·ChLptn在E.coli BL21(DE3)的诱导表达 | 第39-40页 |
| 2. 结果 | 第40-44页 |
| ·ChLptn(ORF)的扩增 | 第40页 |
| ·阳性重组表达质粒的PCR鉴定 | 第40-41页 |
| ·阳性重组表达质粒的酶切鉴定 | 第41-42页 |
| ·重组ChLptn基因的序列分析 | 第42-44页 |
| ·重组ChLptn基因的表达动态和SDS-PAGE分析 | 第44页 |
| 3. 讨论 | 第44-46页 |
| 第三章 ChLptn基因在毕赤酵母中的表达 | 第46-72页 |
| 1.材料和方法 | 第46-57页 |
| ·材料 | 第46-49页 |
| ·主要仪器 | 第46页 |
| ·菌株 | 第46页 |
| ·引物 | 第46-47页 |
| ·常用分子生物学试剂和试剂盒 | 第47页 |
| ·常规化学试剂 | 第47页 |
| ·CaCl_2法所需材料 | 第47页 |
| ·培养基 | 第47-48页 |
| ·培养基中所用的储存液 | 第48页 |
| ·SDS-PAGE所需材料 | 第48-49页 |
| ·方法 | 第49-57页 |
| ·ChLptn(ORF-A)和ChLptn(ORF-B)的制备 | 第49-50页 |
| ·载体pPIC9k的制备 | 第50-51页 |
| ·pPIC9k与ChLptn(ORF-A)和ChLptn(ORF-B)的连接 | 第51-52页 |
| ·用CaCl_2法将连接产物转化入宿主细菌E.coli DH5a | 第52页 |
| ·PCR法鉴定转化克隆 | 第52-53页 |
| ·PCR阳性克隆的酶切鉴定 | 第53页 |
| ·pPIC9k-ChLptn(A)和pPIC9k-ChLptn(B)重组质粒的序列分析 | 第53页 |
| ·pPIC9k-ChLptn(A)和pPIC9k-ChLptn(B)的线性化 | 第53-54页 |
| ·用电转化法将线性化的重组质粒pPIC9k-ChLptn(A)和pPIC9k-ChLptn(B)转化入宿主菌Pichia Pastoris | 第54-55页 |
| ·对电转化后的重组菌落进行表型筛选 | 第55页 |
| ·对酵母中的重组菌落进行PCR鉴定 | 第55-56页 |
| ·pPIC9k-ChLptn(A)和pPIC9k-ChLptn(B)在酵母中的诱导表达 | 第56-57页 |
| 2. 结果 | 第57-66页 |
| ·ChLptn(ORF-A)和ChLptn(ORF-B)的扩增 | 第57-59页 |
| ·阳性重组表达质粒的PCR鉴定 | 第59-60页 |
| ·阳性重组表达质粒的酶切鉴定 | 第60-62页 |
| ·pPIC9k-ChLptn(A)和pPIC9k-ChLptn(B)重组质粒的序列分析 | 第62-64页 |
| ·对转化的重组菌落进行表型筛选结果 | 第64-66页 |
| 3. 讨论 | 第66-72页 |
| 小结 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-78页 |
| 文献综述 | 第78-91页 |
| 附录 | 第91-101页 |
| 附录 1：缩写词表及英汉对照 | 第91-92页 |
| 附录 2：GenBank登陆的ChLptn基因的序列及酶切位点分析图谱 | 第92-94页 |
| 附录 3：质粒pGEM-T-easy图谱 | 第94-95页 |
| 附录 4：质粒pET-32a(+)图谱 | 第95-96页 |
| 附录 5：质粒pPIC9k图谱 | 第96-97页 |
| 附录 6：ChLptn基因克隆入pPGEM- easy载体的测序结果 | 第97-98页 |
| 附录 7：ChLptn基因在大肠杆菌中表达构建重组质粒的测序结果 | 第98-99页 |
| 附录 8：ChLptn(ORF-A)基因在酵母中表达构建重组质粒的测序结果 | 第99-100页 |
| 附录 9：ChLptn(ORF-B)基因在酵母中表达构建重组质粒的测序结果 | 第100-101页 |
| 致谢 | 第101-103页 |
| 原创性声明及版权使用授权说明 | 第103页 |
