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转基因白桦中外源基因整合表达稳定性与遗传变异分析

摘要第1-4页
Abstract第4-9页
1 绪论第9-22页
   ·白桦简介第9-10页
     ·白桦的分类地位第9页
     ·白桦地理分布第9页
     ·白桦的经济作用第9-10页
     ·白桦转基因研究的意义第10页
   ·转基因植物中外源基因的整合特性第10-14页
     ·外源基因在转基因植物中的整合方式及结构变化的多样性第11-12页
     ·不同的整合方式对外源基因表达的影响第12-14页
   ·转基因整合方式的研究策略第14-17页
     ·Southern blot分析第14-15页
     ·rpPCR(reverse primer polymerase chain reaction)第15-16页
     ·外源基因旁侧序列的克隆及测定第16-17页
   ·外源基因的整合机制第17-19页
   ·转基因植物的体细胞克隆变异第19-20页
     ·表型多样性第19页
     ·转基因植物的体细胞克隆变异的细胞学特征第19-20页
     ·DNA多态性第20页
   ·本研究的目的、意义第20-22页
2 材料和方法第22-36页
   ·试验材料第22-23页
     ·材料来源第22页
     ·主要生化试剂第22页
     ·主要仪器设备第22页
     ·基本培养基第22-23页
     ·常用溶液配制第23页
   ·实验方法第23-36页
     ·根尖染色体的统计第23-24页
     ·RAPD引物筛选第24页
     ·PCR扩增及产物的鉴定第24页
     ·数据统计与分析第24-25页
     ·多态性指数(Polymorphism index)第25页
     ·菌种的活化保存第25页
     ·大肠杆菌质粒的提取与纯化(碱裂解法)第25-26页
     ·转化植株GUS活性检测第26页
     ·GUS检测液配方第26-27页
     ·白桦转基因植株基因组DNA提取与纯化第27-28页
     ·转基因白桦基因组DNA单酶切第28-29页
     ·转基因白桦基因组DNA双酶切第29页
     ·转化植株PCR检测:第29-30页
     ·杂交探针的制备第30-32页
     ·Southern印迹杂交第32-34页
     ·转基因植株mRNA表达检测第34-35页
     ·转基因植株田间试验后的再繁殖第35-36页
3 结果与分析第36-46页
   ·基因组DNA不同提取方法比较第36-37页
     ·电泳检测结果第36页
     ·紫外吸收检测结果第36-37页
     ·限制性内切酶酶切分析第37页
   ·转基因白桦的遗传变异分析第37-40页
     ·转基因白桦的染色体变异第37-38页
     ·转基因白桦的DNA多态性第38-40页
   ·外源BT与蜘蛛杀虫肽嵌合基因在转基因抗虫白桦中的整合、拷贝数和稳定性的研究第40-41页
     ·KpnI和BamHI限制性酶切基因组DNA检测BT嵌合基因在转基因白桦中的整合第40页
     ·利用HpaI单酶切基因组DNA,检测bt嵌合基因在转基因白桦中整合的拷贝数第40-41页
     ·BT嵌合基因在转基因白桦中的整合稳定性第41页
   ·BT嵌合基因在转基因白桦中的表达特性第41-44页
     ·转基因白桦RNA的提取第41-42页
     ·bt基因的不同整合拷贝数对转基因白桦的mRNA的表达第42-43页
     ·bt基因表达的时序性第43页
     ·gus、nptⅡ、bt三个基因整合与转录表达的相关性第43-44页
   ·转基因白桦gus表达的稳定性(3年)第44页
   ·优良转基因植株组培再繁殖的可行性第44-46页
4 讨论第46-51页
   ·白桦成熟叶片DNA的提取方法第46-47页
   ·转基因白桦的体细胞克隆变异的细胞学特征第47页
   ·DNA多态性第47-48页
   ·转基因植物产生变异的原因第48-49页
   ·减小转基因植物变异程度的办法第49页
   ·转基因白桦的整合与表达特性第49-51页
结论第51-52页
参考文献第52-61页
附录第61-62页
攻读学位期间已发表的与本研究相关的学术论文第62-63页
致谢第63页

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