| 文献综述 | 第1-29页 |
| 一、贝类附着变态的研究意义 | 第16-17页 |
| 二、海洋贝类附着变态的诱导研究 | 第17-23页 |
| 1.金属离子对贝类附着变态的诱导作用 | 第17-19页 |
| ·K~+离子对贝类附着变态的诱导作用 | 第17-18页 |
| ·Ca~(2+)对贝类附着变态的诱导作用 | 第18页 |
| ·Cr~(6+)离子及其它离子对贝类附着变态的诱导作用 | 第18-19页 |
| 2.自然诱导物对贝类附着变态的诱导作用 | 第19-20页 |
| 3.神经递质类物质对贝类附着变态的诱导作用 | 第20-22页 |
| 4.微生物对贝类附着变态的诱导作用 | 第22页 |
| 5.氨基酸类物质对贝类附着变态的诱导作用 | 第22-23页 |
| 三.影响贝类附着变态的其它因素 | 第23-24页 |
| 1.盐度，温度对贝类附着变态的诱导作用 | 第23页 |
| 2.附着基及其投放时间对贝类附着变态的诱导作用 | 第23-24页 |
| 四.贝类附着变态分子生物学水平方面的研究进展 | 第24-29页 |
| 1.海洋生物附着变态发育过程的细胞质调控机制 | 第24-26页 |
| 2.海洋生物附着变态发育过程的细胞核转录调控机制 | 第26-29页 |
| 第一章 菲律宾蛤仔幼体附着变态前后基因表达变化研究 | 第29-47页 |
| 0 引言 | 第29-31页 |
| 实验材料与试剂 | 第31-32页 |
| 实验方法 | 第32-38页 |
| 1.总RNA的提取： | 第32页 |
| 2.RNA的纯化及检测 | 第32-33页 |
| 3.mRNA的逆转录(cDNA的合成)： | 第33页 |
| 4.cDNA扩增： | 第33页 |
| 5.PCR产物的聚丙烯酰胺电泳检测及显带 | 第33-34页 |
| ·胶的制备 | 第33-34页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第34页 |
| ·银染显色 | 第34页 |
| 6.差异片段的回收及再扩增： | 第34-35页 |
| 7.差异条带的克隆、测序及序列分析： | 第35-38页 |
| ·PCR产物的回收，连接及感受态的制备 | 第35-37页 |
| ·使用UNIQ-10柱式DNA胶回收试剂盒回收PCR产物 | 第35页 |
| ·回收产物和T载体的连接 | 第35-36页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第36页 |
| ·质粒提取 | 第36-37页 |
| ·质粒的酶切鉴定与序列分析 | 第37-38页 |
| 实验结果与分析 | 第38-44页 |
| 1.差异显示PCR结果： | 第38-40页 |
| 2.差异条带的再扩增 | 第40页 |
| 3.PCR产物克隆、测序及序列比对分析结果 | 第40-44页 |
| 实验讨论 | 第44-47页 |
| 1.选取DDRT-PCR方法的可行性： | 第44-45页 |
| 2.差异条带的再扩增 | 第45页 |
| 3.差异序列的分析，鉴定 | 第45-47页 |
| 第二章 化学物质诱导对菲律宾蛤仔附着变态和基因表达的影响 | 第47-62页 |
| 0 引言 | 第47-49页 |
| 实验材料与方法 | 第49-51页 |
| 1.化学物质诱导对菲律宾蛤仔附着变态的影响 | 第49-50页 |
| ·幼苗培育 | 第49页 |
| ·诱导物的配制及系列浓度设计 | 第49-50页 |
| ·神经递质类药物 | 第49页 |
| ·盐类物质 | 第49-50页 |
| ·诱导剂处理持续时间设计 | 第50页 |
| ·变态的标准检测 | 第50页 |
| ·变态率的计算 | 第50页 |
| 2.化学物质诱导对菲律宾蛤仔附着变态时期基因表达的影响 | 第50-51页 |
| ·神经递质类物质对菲律宾蛤仔附着变态时期基因表达的影响 | 第50页 |
| ·无机盐类物质对菲律宾蛤仔附着变态时期基因表达的影响 | 第50-51页 |
| 实验结果 | 第51-58页 |
| 1.神经递质类物质对菲律宾蛤仔眼点幼虫变态的诱导效果 | 第51-53页 |
| ·肾上腺素对菲律宾蛤仔眼点幼虫变态的诱导效果 | 第51页 |
| ·去甲肾上腺素对菲律宾蛤仔眼点幼虫变态的诱导效果 | 第51-52页 |
| ·多巴胺对菲律宾蛤仔眼点幼虫变态的诱导效果 | 第52-53页 |
| ·GABA对菲律宾蛤仔眼点幼虫变态的诱导效果 | 第53页 |
| 2.无机盐类物质对菲律宾蛤仔眼点幼虫变态的诱导效果 | 第53-55页 |
| ·KCl对菲律宾蛤仔眼点幼虫变态的诱导效果 | 第53-54页 |
| ·CaCl_2对菲律宾蛤仔眼点幼虫变态的诱导效果 | 第54-55页 |
| 3.化学物质诱导对菲律宾蛤仔附着变态时期基因表达的影响 | 第55-57页 |
| ·神经递质类物质(肾上腺素)诱导菲律宾蛤仔眼点幼虫后的差异显示PCR结果： | 第55-57页 |
| ·差异条带的再扩增 | 第57页 |
| 4.KCl诱导菲律宾蛤仔眼点幼虫后的差异显示PCR结果： | 第57-58页 |
| 讨论 | 第58-62页 |
| 1.化学物质对菲律宾蛤仔眼点幼虫的诱导研究 | 第58-59页 |
| ·神经递质类物质的诱导效果 | 第58页 |
| ·无机盐类物质的诱导效果 | 第58-59页 |
| 2.化学物质(肾上腺素)对菲律宾蛤仔眼点幼虫基因表达的影响 | 第59-62页 |
| 第三章 菲律宾蛤仔DNA复制、转录相关的基因的克隆、序列分析与原核生物表达 | 第62-98页 |
| 0 前言 | 第62-64页 |
| 实验材料与方法 | 第64-75页 |
| 1.材料及试剂 | 第64-66页 |
| ·克隆所需的材料及试剂 | 第64页 |
| ·原位组织杂交所需材料及试剂 | 第64页 |
| ·原核生物表达所需的载体、材料及试剂 | 第64-66页 |
| ·载体及菌株： | 第64-65页 |
| ·试剂及仪器： | 第65页 |
| ·常用溶液及试剂的配制方法： | 第65-66页 |
| 2.实验方法 | 第66-75页 |
| ·5′RACE扩增replacement histone H3.3的全长cDNA序列 | 第66-67页 |
| ·总RNA的提取 | 第66页 |
| ·RNA的纯化及检测 | 第66页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第66页 |
| ·PCR扩增变异体H3.3基因的3′末端部分序列： | 第66页 |
| ·目的片段的纯化回收 | 第66-67页 |
| ·回收产物连接、克隆与酶切鉴定 | 第67页 |
| ·PCR产物的测序分析 | 第67页 |
| ·5′-Race及其产物的克隆与测序 | 第67页 |
| ·变异体H3.3基因的cDNA序列分析及同源性比较 | 第67页 |
| ·从菲律宾蛤仔的基因组中扩增组蛋白H3及变异体H3.3基因的部分序列 | 第67-68页 |
| ·基因组DNA的提取： | 第67-68页 |
| ·组蛋白H3及变异体H3.3基因的部分序列扩增 | 第68页 |
| ·基因组扩增组蛋白H3： | 第68页 |
| ·基因组扩增H3.3： | 第68页 |
| ·扩增条带的回收、克隆、测序及序列分析 | 第68页 |
| ·组织原位杂交检测菲律宾蛤仔H3.3基因的表达 | 第68-70页 |
| ·石蜡切片的制备 | 第68-69页 |
| ·杂交探针的制备 | 第69页 |
| ·原位杂交及显色 | 第69-70页 |
| ·pGEX-4T-H3.3原核表达载体的构建、表达及抗血清的制备 | 第70-73页 |
| ·表达质粒pGEX-4T-H3.3的构建 | 第70-71页 |
| ·引物设计 | 第70页 |
| ·外源片段的扩增 | 第70-71页 |
| ·PCR产物的克隆 | 第71页 |
| ·PCR产物的测序分析 | 第71页 |
| ·pGEX-4T-H3的构建方式(克隆载体和表达载体的酶切、连接及鉴定)： | 第71页 |
| ·融合表达质粒pGEX-4T-H3.3的诱导表达与SDS-PAGE检测： | 第71-73页 |
| ·表达条件的筛选与优化 | 第71-72页 |
| ·SDS-PAGE电泳检测表达效果 | 第72页 |
| ·IPTG的诱导表达 | 第72页 |
| ·Western blot验证表达的目的条带 | 第72-73页 |
| ·融合蛋白的纯化及抗血清的制备 | 第73-75页 |
| ·融合蛋白纯化条件的摸索 | 第73-74页 |
| ·使用Glutathione Sepharose 4B纯化融合蛋白 | 第73-74页 |
| ·(NH_4)_2SO_4沉淀纯化抗原 | 第74页 |
| ·Sephadex G-75柱子纯化 | 第74页 |
| ·GST-H3.3融合蛋白抗原SDS-PAGE电泳、染色与切胶回收 | 第74-75页 |
| 实验结果与分析 | 第75-95页 |
| ·′RACE扩增变异体H3.3的全长cDNA序列 | 第75-77页 |
| ·RNA的纯化结果 | 第75页 |
| ·H3.33′末端的PCR扩增、克隆及序列分析 | 第75页 |
| ·H3.35′末端的克隆与序列分析 | 第75-76页 |
| ·菲律宾蛤仔H3.3基因的全长cDNA序列及其开放阅读框架分析 | 第76-77页 |
| 2.基因组扩增H3，H3.3基因的部分序列及序列分析： | 第77-84页 |
| ·H3.3及H3L-like的基因组扩增 | 第77-78页 |
| ·H3的基因组扩增 | 第78-79页 |
| ·菲律宾蛤仔H3，H3.3，H3L-like及ORF编码基因的比较结果： | 第79-80页 |
| ·菲律宾蛤仔组蛋白H3.3 ORF区的同源性分析 | 第80-81页 |
| ·菲律宾蛤仔组蛋白H3的同源性分析 | 第81-83页 |
| ·菲律宾蛤仔组蛋白H3L-like的同源性分析 | 第83-84页 |
| 3.Replacement组蛋白H3.3的原位组织杂交 | 第84-86页 |
| ·探针的PCR扩增： | 第84页 |
| ·原位组织杂交结果： | 第84-86页 |
| ·H3.3在菲律宾蛤仔外套膜中的原位组织杂交结果 | 第84-85页 |
| ·H3.3在菲律宾蛤仔鳃中的原位组织杂交结果 | 第85-86页 |
| 4 Replacement组蛋白H3.3的融合表达载体的构建和原核生物表达 | 第86-95页 |
| ·表达质粒pGEX-4T-H3.3的构建 | 第86-88页 |
| ·PCR扩增及序列鉴定结果 | 第86页 |
| ·重组质粒的构建 | 第86-88页 |
| ·pUC-H3.3质粒的酶切鉴定 | 第86-87页 |
| ·pGEX-4T-3表达空载体的酶切鉴定： | 第87页 |
| ·重组质粒的构建： | 第87-88页 |
| ·IPTG的诱导表达及表达条件的筛选与优化： | 第88-92页 |
| ·融合蛋白在宿主菌BL21中的诱导表达 | 第89-90页 |
| ·包函体中融合蛋白的表达情况 | 第89-90页 |
| ·可溶性上清蛋白中融合蛋白的表达情况 | 第90页 |
| ·融合蛋白在宿主菌DH5α中的诱导表达 | 第90-91页 |
| ·包函体中融合蛋白的表达情况 | 第90-91页 |
| ·上清液中融合蛋白的表达情况 | 第91页 |
| ·融合蛋白在宿主菌JM109中的诱导表达 | 第91-92页 |
| ·包函体中融合蛋白的表达情况 | 第91-92页 |
| ·上清液中融合蛋白的表达情况 | 第92页 |
| ·pGEX-4T-H3.3融合表达载体在DH5α中的扩培及诱导表达 | 第92-93页 |
| ·融合蛋白GST-H3.3的表达及其鉴定结果 | 第93页 |
| ·抗原纯化条件的摸索 | 第93-94页 |
| ·Glutathione Sepharose 4B柱纯化融合蛋白 | 第93-94页 |
| ·(NH_4)_2SO_4沉淀纯化抗原 | 第94页 |
| ·Sephadex G-75柱子纯化 | 第94页 |
| ·抗体制备 | 第94-95页 |
| 讨论 | 第95-98页 |
| 1.组蛋白H3及相关基因的克隆与序列分析 | 第95-96页 |
| 2.Replacement histone H3.3的组织原位杂交结果 | 第96-97页 |
| 3.融合蛋白GST-H3.3的表达及其鉴定结果 | 第97-98页 |
| 附：菲律宾蛤仔28S核糖体rDNA的染色体定位研究 | 第98-105页 |
| 0 前言 | 第98-100页 |
| 实验材料和方法： | 第100-103页 |
| 1.实验材料及试剂： | 第100页 |
| 2.染色体的制备： | 第100页 |
| 3.探针来源： | 第100-101页 |
| 4.FISH流程 | 第101-103页 |
| ·染色体制片的准备 | 第101页 |
| ·探针的制备： | 第101-102页 |
| ·PCR扩增FISH探针 | 第101-102页 |
| ·探针变性 | 第102页 |
| ·FISH杂交 | 第102-103页 |
| ·标本变性及杂交 | 第102页 |
| ·洗脱 | 第102页 |
| ·封阻及复染 | 第102页 |
| ·信号检测 | 第102-103页 |
| 实验结果 | 第103-105页 |
| ·S探针的PCR扩增结果： | 第103页 |
| 2.FISH结果： | 第103-105页 |
| 讨论 | 第105-106页 |
| 论文小结 | 第106-108页 |
| 参考文献 | 第108-121页 |
| 个人简历 | 第121-122页 |
| 致谢 | 第122页 |
