| 目录 | 第1-8页 |
| 摘要 超嗜热菌Aquifex aeolicus 亮氨酰-tRNA 合成酶和tRNALeu的相互作用 | 第8-11页 |
| ABSTRACT The interaction between Aquifex aeolicus leucyl-tRNA synthetase and tRNALeu | 第11-15页 |
| 第一部分 亮氨酰-tRNA 合成酶亚基功能与结构基础关系的研究 | 第15-78页 |
| 第一章 来源于大肠杆菌和超嗜热菌重组亮氨酰-tRNA合成酶的性质研究 | 第15-45页 |
| 摘要 | 第15页 |
| 关键词 | 第15-16页 |
| 1. 引言 | 第16-19页 |
| 2. 材料与方法 | 第19-27页 |
| ·材料 | 第19-20页 |
| ·质粒 | 第20页 |
| ·DNA 片段扩增以及含有LeuRS 突变基因的质粒的构建 | 第20-23页 |
| ·重组LeuRS 基因的表达以及重组LeuRS 的纯化 | 第23-24页 |
| ·圆二色性(CD)光谱的测定 | 第24页 |
| ·重组LeuRS 氨基酸活化反应动力学常数的测定 | 第24-25页 |
| ·重组LeuRS 氨基酰化反应动力学常数的测定 | 第25-26页 |
| ·SLeuRSαβ亮氨酰化活性位点滴定 | 第26页 |
| ·SLeuRSαβ最适反应温度以及热稳定性测定 | 第26-27页 |
| 3. 结果 | 第27-37页 |
| ·重组质粒的构建酶基因的表达与酶的纯化 | 第27-28页 |
| ·LeuRS 突变酶CD 光谱测定结果 | 第28-29页 |
| ·LeuRS 突变酶活力变化 | 第29-31页 |
| ·SLeuRSαβ变种只有一个氨基酰化活性位点 | 第31-32页 |
| ·SLeuRSαβ突变酶稳态动力学性质 | 第32-35页 |
| ·SLeuRSαβ突变酶活力温度关系以及热稳定性 | 第35-37页 |
| 4. 讨论 | 第37-42页 |
| 参考文献 | 第42-45页 |
| 第二章 亮氨酰-tRNA 合成酶 CP1 结构域对于种属间tRNALeu的识别至关重要 | 第45-78页 |
| 摘要 | 第45-46页 |
| 关键词 | 第46页 |
| 1. 引言 | 第46-51页 |
| 2. 材料和方法 | 第51-57页 |
| ·材料 | 第51页 |
| ·DNA 片段的扩增以及含有LeuRS 突变基因的质粒的构建 | 第51-53页 |
| ·LeuRS 突变酶基因的表达以及LeuRS 嵌合酶的纯化 | 第53页 |
| ·圆二色性(CD) 光谱的测定 | 第53-54页 |
| ·LeuRS 嵌合酶氨基酸活化反应活力及动力学常数测定 | 第54页 |
| ·LeuRS 嵌合酶的氨基酰化反应活力及动力学常数的测定 | 第54页 |
| ·LeuRS 嵌合酶误氨基酰化反应的测定 | 第54-55页 |
| ·LeuRS 嵌合酶编校反应ATP 消耗的测定 | 第55页 |
| ·同位素标记的误氨基酰化产物的制备和去氨基酰化 | 第55-57页 |
| 3. 结果 | 第57-67页 |
| ·重组质粒的构建酶基因的表达与酶的纯化 | 第57-59页 |
| ·LeuRS 嵌合酶CD 光谱测定结果(51) | 第59页 |
| ·LeuRS 嵌合酶活力变化 | 第59-60页 |
| ·LeuRS 嵌合酶对对应氨基酸和非对应氨基酸的识别 | 第60-61页 |
| ·嵌合酶氨基酰化反应稳态动力学性质 | 第61-63页 |
| ·LeuRS 嵌合酶误氨基酰化反应 | 第63-64页 |
| ·LeuRS 嵌合酶编校反应ATP 消耗 | 第64-66页 |
| ·LeuRS 嵌合酶对误氨基酰化产物的编校 | 第66-67页 |
| 4. 讨论 | 第67-73页 |
| 参考文献 | 第73-78页 |
| 第二部分 超嗜热菌亮氨酰-tRNA 合成酶编校功能的研究 | 第78-156页 |
| 第三章 超嗜热菌亮氨酰-tRNA 合成酶编校功能的研究 | 第78-109页 |
| 摘要 | 第78页 |
| 关键词 | 第78-79页 |
| 1. 引言 | 第79-84页 |
| 2. 材料和方法 | 第84-88页 |
| ·材料 | 第84-85页 |
| ·LeuRS 突变体基因的构建表达以及突变体LeuRS 的纯化 | 第85-86页 |
| ·圆二色性(CD) 光谱的测定 | 第86页 |
| ·LeuRS 突变酶的氨基酸活化反应动力学常数测定 | 第86页 |
| ·LeuRS 突变酶氨基酰化反应活力及动力学常数的测定 | 第86-87页 |
| ·LeuRS 突变酶误氨基酰化反应的测定 | 第87页 |
| ·LeuRS 突变酶编校反应ATP 消耗的测定 | 第87页 |
| ·LeuRS 突变酶体内补偿实验 | 第87-88页 |
| 3. 结果 | 第88-100页 |
| ·LeuRS 突变位点的选择与构建 | 第88-89页 |
| ·LeuRS 突变酶基因的表达与酶的纯化 | 第89-90页 |
| ·LeuRS 突变酶CD 光谱测定结果 | 第90页 |
| ·LeuRS 突变酶的活力变化 | 第90-92页 |
| ·LeuRS 突变酶对对应和非对应氨基酸的识别 | 第92-93页 |
| ·LeuRS 突变酶的氨基酰化反应稳态动力学性质 | 第93-94页 |
| ·LeuRS 突变酶误氨基酰化反应 | 第94-96页 |
| ·LeuRS 突变酶编校反应ATP 消耗 | 第96-97页 |
| ·不同LeuRS 突变酶对温度敏感菌株KL231 的拯救 | 第97-100页 |
| 4. 讨论 | 第100-104页 |
| 参考文献 | 第104-109页 |
| 第四章 超嗜热菌 Aquifex aeolicus 亮氨酰-tRNA 合成酶CP1 结构域独立行使编校功能 | 第109-156页 |
| 摘要 | 第109页 |
| 关键词 | 第109-110页 |
| 1. 引言 | 第110-115页 |
| 2. 材料和方法 | 第115-121页 |
| ·材料 | 第115-116页 |
| ·DNA 片段扩增以及含有不同CP1 基因的质粒的构建 | 第116-117页 |
| ·CP1 基因的表达以及不同CP1 结构域的纯化 | 第117-118页 |
| ·圆二色性(CD) 光谱的测定 | 第118-119页 |
| ·RNA 转录产物的制备 | 第119-120页 |
| ·同位素标记的误氨基酰化产物的制备 | 第120-121页 |
| ·CP1 结构域的编校功能及动力学常数的测定 | 第121页 |
| 3. 结果 | 第121-140页 |
| ·不同CP1 结构域以及突变体的设计和构建 | 第121-125页 |
| ·重组质粒的构建 CP1 基因的表达与CP1 结构域的纯化 | 第125-126页 |
| ·CP1 结构域及突变体CD 光谱测定结果 | 第126-127页 |
| ·同位素标记的误氨基酰化产物 | 第127-128页 |
| ·只有Aa-CP1 能够对Ile-tRNALeu行使编校功能 | 第128-130页 |
| ·A.a eolicus LeuRS 的β亚基能够赋予独立的E. coli CP1 结构域编校功能 | 第130-133页 |
| ·Aa-CP1 中20-aa 模体对于CP1 结构域编校Ile-tRNA~(Leu)至关重要 | 第133-136页 |
| ·细菌来源的CP1 结构域均能编校Ile-minihelix~(Leu) | 第136-138页 |
| ·20-aa 模体增强CP1 对小螺旋的编校能力 | 第138-140页 |
| 4. 讨论 | 第140-148页 |
| 参考文献 | 第148-156页 |
| 结论 | 第156-159页 |
| 附录 本论文缩写汇编 | 第159-162页 |
| 在学期间论文发表会议报告和获奖目录 | 第162-165页 |
| 致谢 | 第165页 |
