人肝再生增强因子基因的克隆、真核表达载体构建及原核表达
| 中文摘要 | 第1-9页 |
| 英文摘要 | 第9-10页 |
| 1 前言 | 第10-17页 |
| ·肝再生增强因子的国内外研究动态 | 第10-11页 |
| ·肝再生增强因子的分子生物学特性及功能 | 第11-13页 |
| ·ALR的基因结构 | 第11-12页 |
| ·ALR的理化特性及生物学功能 | 第12-13页 |
| ·ALR的组织分布 | 第13页 |
| ·肝再生增强因子超家族 | 第13-15页 |
| ·血源性肝细胞生长因子 | 第14页 |
| ·肝源性肝细胞刺激物 | 第14-15页 |
| ·胞源性肝再生增强因子 | 第15页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第15-17页 |
| 2 材料和方法 | 第17-31页 |
| ·材料 | 第17-20页 |
| ·胎肝、质粒、菌株及其他 | 第17页 |
| ·引物 | 第17页 |
| ·主要试剂 | 第17-18页 |
| ·主要仪器设备 | 第18页 |
| ·实验过程所用缓冲液与常用试剂的配制 | 第18-20页 |
| ·方法 | 第20-31页 |
| ·hALR基因的分子克隆 | 第20-24页 |
| ·hALR基因真核表达载体构建 | 第24-26页 |
| ·hALR基因在大肠杆菌BL21中的诱导表达 | 第26-31页 |
| 3 结果 | 第31-43页 |
| ·hALR基因的分子克隆 | 第31-34页 |
| ·胎肝总RNA的提取 | 第31页 |
| ·RT-PCR | 第31-32页 |
| ·PCR产物的单酶切鉴定 | 第32页 |
| ·重组子PET-A的酶切鉴定 | 第32-33页 |
| ·重组子PET-A的PCR鉴定 | 第33页 |
| ·核苷酸序列分析及同源性比较 | 第33-34页 |
| ·hALR基因真核表达载体构建 | 第34-35页 |
| ·pcDNA3.1(+)载体质粒酶切 | 第34页 |
| ·重组子pcD-A的酶切鉴定 | 第34-35页 |
| ·hALR基因在大肠杆菌BL21中的诱导表达 | 第35-43页 |
| ·hALR基因的IPTG浓度梯度诱导表达 | 第35-36页 |
| ·hALR基因的时间梯度诱导表达 | 第36页 |
| ·hALR基因的表达部位分析 | 第36-37页 |
| ·hALR基因的未诱导时间梯度表达 | 第37-38页 |
| ·Western-blot结果 | 第38页 |
| ·诱导表达蛋白的定量分析 | 第38-43页 |
| 4 讨论 | 第43-50页 |
| ·hALR基因的分子克隆 | 第43-46页 |
| ·胎肝的选择 | 第43页 |
| ·胎肝组织RNA的提取纯度对于RT-PCR的影响 | 第43-44页 |
| ·优化PCR条件 | 第44页 |
| ·电泳在实验中的作用 | 第44-45页 |
| ·酶解反应过程 | 第45页 |
| ·DNA分子的连接及重组子导入受体细胞 | 第45-46页 |
| ·hALR基因真核表达载体的构建 | 第46页 |
| ·Kozak序列 | 第46页 |
| ·重组子pcD-A的酶切鉴定结果分析 | 第46页 |
| ·hALR基因在大肠杆菌BL21中的诱导表达 | 第46-50页 |
| ·大肠杆菌(E.coli)表达外源基因的特点 | 第46-47页 |
| ·外源基因在E.coli中高效表达的原理 | 第47-48页 |
| ·hALR基因的诱导表达 | 第48页 |
| ·Western-blot检测 | 第48-50页 |
| 5 结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-57页 |
| 附录 | 第57-62页 |
| 中英文全名对照表 | 第62-63页 |
| 攻读硕士期间发表的学术论文 | 第63-64页 |
| 致谢 | 第64页 |
