| 中文摘要 | 第1-3页 |
| 英文摘要 | 第3-7页 |
| 1 引言 | 第7-9页 |
| 2 材料与方法 | 第9-20页 |
| ·材料 | 第9-11页 |
| ·菌株及克隆载体.表达载体.酵母细胞 | 第9页 |
| ·各种酶类和生物试剂 | 第9-10页 |
| ·主要仪器与设备 | 第10页 |
| ·培养基和抗生素 | 第10-11页 |
| ·PCR引物 | 第11页 |
| ·方法 | 第11-20页 |
| ·PCR扩增 | 第11页 |
| ·目的DNA片段的纯化与回收 | 第11-12页 |
| ·目的DNA片段与载体的连接 | 第12页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第12页 |
| ·转化 | 第12-13页 |
| ·挑斑 | 第13页 |
| ·质粒的提取 | 第13页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第13-14页 |
| ·重组表达载体的构建及鉴定 | 第14-17页 |
| ·电转化毕赤酵母SMD1168 | 第17页 |
| ·重组酵母菌株的筛选 | 第17-18页 |
| ·重组酵母菌株的菌种保存 | 第18页 |
| ·重组质粒的诱导表达 | 第18-19页 |
| ·表达产物的初步纯化、检测和鉴定 | 第19-20页 |
| 3 结果 | 第20-24页 |
| ·重组PCR | 第20页 |
| ·重组pGEM-T／2C3ABC质粒的鉴定 | 第20-21页 |
| ·电泳鉴定 | 第21页 |
| ·PCR鉴定 | 第21页 |
| ·酶切鉴定 | 第21页 |
| ·重组质粒的序列分析 | 第21页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第21-23页 |
| ·目的片段pGEM-2C3ABC与pPICZaA3.6K载体的酶切 | 第22页 |
| ·重组表达质粒的电泳鉴定 | 第22页 |
| ·重组表达质粒酶切及PCR鉴定 | 第22页 |
| ·重组表达质粒线化和整合到毕赤酵母染色体的鉴定 | 第22-23页 |
| ·重组表达质粒的氨基酸分析 | 第23页 |
| ·表达产物的检测 | 第23-24页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第23-24页 |
| ·Western blot分析 | 第24页 |
| 4 讨论 | 第24-28页 |
| ·PCR方法 | 第24页 |
| ·重组表达载体pPICZaA-2C3ABC的构建 | 第24页 |
| ·电转化方法 | 第24-25页 |
| ·表达载体与酵母染色体的整合 | 第25页 |
| ·Zeocin~(TM)抗生素筛选高拷贝菌株 | 第25页 |
| ·外源基因在毕赤酵母中的表达 | 第25-28页 |
| ·分泌型表达 | 第26页 |
| ·影响表达的因素 | 第26-28页 |
| ·分泌表达产物的加工和修饰 | 第28页 |
| ·Western blotting检测 | 第28页 |
| 5 结论 | 第28-37页 |
| 6 文献综述 | 第37-50页 |
| ·概述 | 第37-38页 |
| ·FMDV基因组结构与功能研究 | 第38-40页 |
| ·免疫学研究进展 | 第40-43页 |
| ·FMDV诊断检疫技术研究 | 第43-47页 |
| ·FMDV新型疫苗研究概况 | 第47-50页 |
| 致谢 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-58页 |