生防萎缩芽孢杆菌CAB-1菌株几丁质酶基因的克隆和原核表达
| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 1 引言 | 第10-17页 |
| ·植物病害的生物防治 | 第10页 |
| ·几丁质酶的研究进展 | 第10-13页 |
| ·几丁质酶基因的研究及应用 | 第13-14页 |
| ·芽孢杆菌菌种的鉴定 | 第14-15页 |
| ·外源基因的原核表达 | 第15-16页 |
| ·本研究目的及意义 | 第16-17页 |
| 2 试验材料 | 第17-21页 |
| ·菌株及质粒 | 第17页 |
| ·菌株 | 第17页 |
| ·质粒 | 第17页 |
| ·培养基 | 第17-18页 |
| ·主要试剂和材料仪器 | 第18-21页 |
| ·化学试剂 | 第18页 |
| ·试剂盒 | 第18-19页 |
| ·SDS-PAGE 所用试剂 | 第19页 |
| ·主要仪器 | 第19-21页 |
| 3 试验方法 | 第21-32页 |
| ·菌株筛选 | 第21页 |
| ·供试菌株 | 第21页 |
| ·菌株拮抗活性测定 | 第21页 |
| ·菌株几丁质酶活性的筛选 | 第21页 |
| ·菌株鉴定 | 第21-26页 |
| ·生理生化鉴定 | 第21-22页 |
| ·细菌总基因组DNA 的提取 | 第22页 |
| ·16S rDNA 的克隆 | 第22-23页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第23-24页 |
| ·转化大肠杆菌DH5α | 第24页 |
| ·阳性重组子的鉴定和测序 | 第24-25页 |
| ·gyrB 的克隆和测序 | 第25页 |
| ·系统发育分析 | 第25-26页 |
| ·几丁质酶基因克隆 | 第26-29页 |
| ·全序列分析及几丁质酶基因定位 | 第26页 |
| ·几丁质酶基因的克隆 | 第26页 |
| ·PCR 反应体系及扩增条件 | 第26-27页 |
| ·质粒提取 | 第27-28页 |
| ·PCR 产物和载体的双酶切 | 第28页 |
| ·酶切产物纯化 | 第28页 |
| ·酶切产物的连接 | 第28-29页 |
| ·转化大肠杆菌及重组质粒的筛选 | 第29页 |
| ·生物信息学分析 | 第29页 |
| ·氨基酸序列分析及信号肽预测 | 第29页 |
| ·保守结构域分析 | 第29页 |
| ·原核表达 | 第29-30页 |
| ·目的基因转化表达感受态细胞及转化子验证 | 第29页 |
| ·诱导表达 | 第29-30页 |
| ·诱导蛋白的活性研究 | 第30-31页 |
| ·几丁质酶活性检测 | 第30-31页 |
| ·抑菌活性检测 | 第31页 |
| ·诱导表达条件的优化 | 第31-32页 |
| ·温度对蛋白表达的影响 | 第31页 |
| ·IPTG 浓度对蛋白表达的影响 | 第31-32页 |
| 4 结果与分析 | 第32-41页 |
| ·目标生防菌株的筛选 | 第32页 |
| ·生防菌株的鉴定 | 第32-34页 |
| ·生理生化鉴定 | 第32-33页 |
| ·分子鉴定 | 第33-34页 |
| ·几丁质酶基因分析 | 第34-36页 |
| ·几丁质酶定位和序列比对 | 第34页 |
| ·几丁质酶基因的生物信息学分析 | 第34-36页 |
| ·几丁质酶基因的克隆和原核表达 | 第36-38页 |
| ·目的基因扩增 | 第36页 |
| ·表达载体构建 | 第36-37页 |
| ·蛋白诱导表达 | 第37-38页 |
| ·表达蛋白性质分析 | 第38-39页 |
| ·几丁质酶定性检测 | 第38页 |
| ·几丁质酶定量检测 | 第38-39页 |
| ·几丁质酶抑菌活性检测 | 第39页 |
| ·几丁质酶chit1 基因异源表达条件优化 | 第39-41页 |
| ·温度对表达的影响 | 第39-40页 |
| ·IPTG 浓度对表达的影响 | 第40-41页 |
| 5 讨论 | 第41-44页 |
| ·分泌几丁质酶生防菌株的筛选 | 第41页 |
| ·几丁质酶基因的结构及表达产物抑菌活性 | 第41-42页 |
| ·目的基因的原核表达 | 第42页 |
| ·芽孢杆菌的鉴定 | 第42-44页 |
| 6 结论 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-51页 |
| 附录 | 第51-58页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第58-59页 |
| 作者简历 | 第59-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
