中文摘要 | 第1-9页 |
1 文献综述 | 第9-36页 |
1.1 目的基因 | 第9-21页 |
1.1.1 植物抗病虫害基因 | 第9-16页 |
1.1.1.1 抗植物虫害基因 | 第10-12页 |
1.1.1.2 抗植物病毒基因 | 第12-15页 |
1.1.1.3 植物抗真菌病害基因 | 第15-16页 |
1.1.2 抗非生物胁迫、改良作物产品质量的基因 | 第16-19页 |
1.1.2.1 抗非生物胁迫基因 | 第16-17页 |
1.1.2.2 改良作物品种质量的基因 | 第17-19页 |
1.1.2.3 提高作物产量的基因 | 第19页 |
1.1.3 改变植物其他性状的基因及植物医药基因工程 | 第19-21页 |
1.1.3.1 改变植物其他性状的基因 | 第19-20页 |
1.1.3.2 植物医药基因工程 | 第20-21页 |
1.2 转基因的方法 | 第21-26页 |
1.2.1 根癌农杆菌Ti质粒介导基因转化 | 第22页 |
1.2.2 DNA的直接导入 | 第22-25页 |
1.2.2.1 化学诱导DNA直接转化 | 第22-23页 |
1.2.2.2 物理法诱导DNA直接转化 | 第23-25页 |
1.2.3 种质系统介导基因转化 | 第25-26页 |
1.3 作物转基因研究动态 | 第26-30页 |
1.4 果树转基因研究进展 | 第30-36页 |
2 引言 | 第36-37页 |
3 材料与方法 | 第37-48页 |
3.1 试材 | 第37页 |
3.2 方法 | 第37-48页 |
3.2.1 愈伤组织的诱导 | 第38页 |
3.2.2 LEA3蛋白基因的转化 | 第38页 |
3.2.3 转化愈伤组织的筛选及植株再生 | 第38页 |
3.2.4 GUS基因的瞬时表达 | 第38-39页 |
3.2.5 草莓总DNA的提取(CTAB法) | 第39-40页 |
3.2.6 质粒提取 | 第40页 |
3.2.7 质粒DNA限制性酶切及LEA3片段的回收 | 第40-41页 |
3.2.8 探针的标记 | 第41-43页 |
3.2.9 阳性植株初筛 | 第43-44页 |
3.2.10 Southern blot | 第44-45页 |
3.2.11 RNA的提取 | 第45-46页 |
3.2.12 Northern点杂交 | 第46页 |
3.2.13 Western blot分析 | 第46-48页 |
3.2.14 盐胁迫处理 | 第48页 |
4 结果与分析 | 第48-71页 |
4.1 愈伤组织的诱导及植株再生 | 第48-54页 |
4.1.1 叶片愈伤组织的诱导 | 第48-50页 |
4.1.2 花药愈伤组织的诱导 | 第50-52页 |
4.1.3 植株再生培养 | 第52-54页 |
4.2 LEA3基因的导入 | 第54-58页 |
4.2.1 LEA3基因的序列及质粒图谱 | 第54-55页 |
4.2.2 基因导入及抗性愈伤组织的筛选 | 第55-56页 |
4.2.3 转化植株再生培养 | 第56-57页 |
4.2.4 转化植株的再选择 | 第57-58页 |
4.3 GUS基因的瞬时表达 | 第58-60页 |
4.4 质粒的提取及酶切 | 第60-61页 |
4.5 探针的制备 | 第61-64页 |
4.5.1 探针斑点杂交灵敏度检测 | 第61页 |
4.5.2 Southern杂交中探针用量的确定 | 第61-62页 |
4.5.3 标准分子量DL2000探针的标记 | 第62-64页 |
4.6 草莓总DNA的提取 | 第64页 |
4.7 DNA点杂交对转化植株进行初筛 | 第64-65页 |
4.8 转基因植株Southern blot分析 | 第65-67页 |
4.9 转基因植株的RNA点杂交分析 | 第67-68页 |
4.10 转基因植株的Western blot分析 | 第68-69页 |
4.11 转基因植株抗盐性分析 | 第69-71页 |
5 讨论 | 第71-76页 |
5.1 草莓基因型及外源基因转化对组织再生的影响 | 第71页 |
5.2 影响外源基因转化效率的因素 | 第71-73页 |
5.3 LEA3基因与转化植株抗盐性的关系 | 第73-74页 |
5.4 LEA3基因和bar基因的共整合特性 | 第74-75页 |
5.5 外源基因的插入对内源基因表达的影响 | 第75-76页 |
6 结论 | 第76-77页 |
参考文献 | 第77-91页 |
英文摘要 | 第91-93页 |
致谢 | 第93页 |