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LEA3蛋白基因对草莓的遗传转化研究

中文摘要第1-9页
1 文献综述第9-36页
 1.1 目的基因第9-21页
  1.1.1 植物抗病虫害基因第9-16页
   1.1.1.1 抗植物虫害基因第10-12页
   1.1.1.2 抗植物病毒基因第12-15页
   1.1.1.3 植物抗真菌病害基因第15-16页
  1.1.2 抗非生物胁迫、改良作物产品质量的基因第16-19页
   1.1.2.1 抗非生物胁迫基因第16-17页
   1.1.2.2 改良作物品种质量的基因第17-19页
   1.1.2.3 提高作物产量的基因第19页
  1.1.3 改变植物其他性状的基因及植物医药基因工程第19-21页
   1.1.3.1 改变植物其他性状的基因第19-20页
   1.1.3.2 植物医药基因工程第20-21页
 1.2 转基因的方法第21-26页
  1.2.1 根癌农杆菌Ti质粒介导基因转化第22页
  1.2.2 DNA的直接导入第22-25页
   1.2.2.1 化学诱导DNA直接转化第22-23页
   1.2.2.2 物理法诱导DNA直接转化第23-25页
  1.2.3 种质系统介导基因转化第25-26页
 1.3 作物转基因研究动态第26-30页
 1.4 果树转基因研究进展第30-36页
2 引言第36-37页
3 材料与方法第37-48页
 3.1 试材第37页
 3.2 方法第37-48页
  3.2.1 愈伤组织的诱导第38页
  3.2.2 LEA3蛋白基因的转化第38页
  3.2.3 转化愈伤组织的筛选及植株再生第38页
  3.2.4 GUS基因的瞬时表达第38-39页
  3.2.5 草莓总DNA的提取(CTAB法)第39-40页
  3.2.6 质粒提取第40页
  3.2.7 质粒DNA限制性酶切及LEA3片段的回收第40-41页
  3.2.8 探针的标记第41-43页
  3.2.9 阳性植株初筛第43-44页
  3.2.10 Southern blot第44-45页
  3.2.11 RNA的提取第45-46页
  3.2.12 Northern点杂交第46页
  3.2.13 Western blot分析第46-48页
  3.2.14 盐胁迫处理第48页
4 结果与分析第48-71页
 4.1 愈伤组织的诱导及植株再生第48-54页
  4.1.1 叶片愈伤组织的诱导第48-50页
  4.1.2 花药愈伤组织的诱导第50-52页
  4.1.3 植株再生培养第52-54页
 4.2 LEA3基因的导入第54-58页
  4.2.1 LEA3基因的序列及质粒图谱第54-55页
  4.2.2 基因导入及抗性愈伤组织的筛选第55-56页
  4.2.3 转化植株再生培养第56-57页
  4.2.4 转化植株的再选择第57-58页
 4.3 GUS基因的瞬时表达第58-60页
 4.4 质粒的提取及酶切第60-61页
 4.5 探针的制备第61-64页
  4.5.1 探针斑点杂交灵敏度检测第61页
  4.5.2 Southern杂交中探针用量的确定第61-62页
  4.5.3 标准分子量DL2000探针的标记第62-64页
 4.6 草莓总DNA的提取第64页
 4.7 DNA点杂交对转化植株进行初筛第64-65页
 4.8 转基因植株Southern blot分析第65-67页
 4.9 转基因植株的RNA点杂交分析第67-68页
 4.10 转基因植株的Western blot分析第68-69页
 4.11 转基因植株抗盐性分析第69-71页
5 讨论第71-76页
 5.1 草莓基因型及外源基因转化对组织再生的影响第71页
 5.2 影响外源基因转化效率的因素第71-73页
 5.3 LEA3基因与转化植株抗盐性的关系第73-74页
 5.4 LEA3基因和bar基因的共整合特性第74-75页
 5.5 外源基因的插入对内源基因表达的影响第75-76页
6 结论第76-77页
参考文献第77-91页
英文摘要第91-93页
致谢第93页

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