中文摘要 | 第1-7页 |
1 前言 | 第7-26页 |
1.1 玉米雄性不育在育种中的应用及前景 | 第8-13页 |
1.1.1 细胞质雄性不育 | 第8-11页 |
1.1.2 核雄性不育 | 第11-13页 |
1.2 玉米雄穗的分化过程 | 第13-15页 |
1.3 差异表达基因(片段)的分离 | 第15-24页 |
1.3.1 示差筛选和扣除杂交 | 第15-16页 |
1.3.2 mRNA差异显示技术 | 第16-17页 |
1.3.3 RNA指纹技术 | 第17页 |
1.3.4 代表性差示分析 | 第17-18页 |
1.3.5 基因表达序列分析 | 第18-19页 |
1.3.6 抑制扣除技术 | 第19-23页 |
1.3.6.1 SSH技术的基本原理 | 第19页 |
1.3.6.2 SSH技术的主要过程 | 第19-21页 |
1.3.6.3 SSH技术的优缺点评析 | 第21-22页 |
1.3.6.4 SSH技术的最新研究进展 | 第22-23页 |
1.3.7 交互扣除RNA差别显示技术 | 第23-24页 |
1.4 本研究的目的、意义及研究技术路线 | 第24-26页 |
1.4.1 本研究的目的、意义 | 第24-25页 |
1.4.2 研究技术路线 | 第25-26页 |
2 材料与方法 | 第26-43页 |
2.1 材料 | 第26-27页 |
2.1.1 试验材料 | 第26-27页 |
2.1.2 菌种 | 第27页 |
2.1.3 试剂 | 第27页 |
2.2 方法 | 第27-42页 |
2.2.1 玉米雄穗分化过程中各时期形态的显微观察 | 第27页 |
2.2.2 近等位基因系琼42Qms和琼42小花分化期雄穗总RNA提取及mRNA纯化 | 第27-30页 |
2.2.2.1 小花分化期雄穗总RNA提取 | 第27-28页 |
2.2.2.2 mRNA的纯化 | 第28-30页 |
2.2.3 近等位基因系42Qms和琼42差异表达分析 | 第30-39页 |
2.2.3.1 cDNA第一链合成 | 第30页 |
2.2.3.2 cDNA第二链合成 | 第30-31页 |
2.2.3.3 RsaⅠ酶切 | 第31-32页 |
2.2.3.4 连接接头 | 第32-33页 |
2.2.3.5 第一次杂交 | 第33页 |
2.2.3.6 第二次杂交 | 第33-34页 |
2.2.3.7 PCR扩增 | 第34-36页 |
2.2.3.8 PCR扩增产物的克隆及重组子的筛选 | 第36-39页 |
2.2.3.8.1 连接 | 第36页 |
2.2.3.8.2 宿主菌E.coli DH5α感受态细胞的制备 | 第36-37页 |
2.2.3.8.3 连接产物转化宿主菌E.coli DH5α感受态细胞 | 第37页 |
2.2.3.8.4 质粒的微量提取 | 第37-38页 |
2.2.3.8.5 重组子的酶切鉴定 | 第38-39页 |
2.2.4 Northen杂交分析 | 第39-42页 |
2.2.4.1 琼42和琼42Qms小花分化期、抽穗成熟期的叶片、雄穗总RNA的提取 | 第39页 |
2.2.4.2 DNA探针的制备 | 第39-40页 |
2.2.4.2.1 利用低熔点琼脂糖凝胶回收目的片段 | 第39页 |
2.2.4.2.2 DIG树己DNA | 第39-40页 |
2.2.4.3 RNA的印迹转移 | 第40-41页 |
2.2.4.3.1 RNA甲醛电泳的准备 | 第40页 |
2.2.4.3.2 RNA电泳 | 第40页 |
2.2.4.3.3 凝胶印迹转移 | 第40-41页 |
2.2.4.4 预杂交和杂交 | 第41页 |
2.2.4.5 杂交后洗膜 | 第41-42页 |
2.2.4.6 免疫检测 | 第42页 |
2.3 测序 | 第42-43页 |
3 结果与分析 | 第43-48页 |
3.1 玉米雄穗各分化时期形态的观察 | 第43页 |
3.2 小花分化期雄穗总RNA的提取 | 第43-44页 |
3.3 mRNA的纯化 | 第44页 |
3.4 近等位基因系琼42和琼42Qms的差异表达分析 | 第44-45页 |
3.5 PCR扩增产物的克隆及重组子筛选 | 第45-46页 |
3.6 Northern杂交分析 | 第46-47页 |
3.7 序列分析 | 第47-48页 |
4 讨论 | 第48-51页 |
4.1 玉米雄穗各分化时期的显微观察 | 第48-49页 |
4.2 琼42和琼42Qms小花分化期雄穗总RNA的提取 | 第49-50页 |
4.3 PCR产物的克隆 | 第50页 |
4.4 近等位基因系琼42和琼42Qms差异表达分析 | 第50页 |
4.5 差异片段的序列测定及分析 | 第50-51页 |
5 结论 | 第51-52页 |
6 参考文献 | 第52-61页 |
7 英文摘要 | 第61-63页 |
8 附图 | 第63-66页 |
9 致谢 | 第66页 |