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玉米温敏型核雄性不育基因的差异表达

中文摘要第1-7页
1 前言第7-26页
 1.1 玉米雄性不育在育种中的应用及前景第8-13页
  1.1.1 细胞质雄性不育第8-11页
  1.1.2 核雄性不育第11-13页
 1.2 玉米雄穗的分化过程第13-15页
 1.3 差异表达基因(片段)的分离第15-24页
  1.3.1 示差筛选和扣除杂交第15-16页
  1.3.2 mRNA差异显示技术第16-17页
  1.3.3 RNA指纹技术第17页
  1.3.4 代表性差示分析第17-18页
  1.3.5 基因表达序列分析第18-19页
  1.3.6 抑制扣除技术第19-23页
   1.3.6.1 SSH技术的基本原理第19页
   1.3.6.2 SSH技术的主要过程第19-21页
   1.3.6.3 SSH技术的优缺点评析第21-22页
   1.3.6.4 SSH技术的最新研究进展第22-23页
  1.3.7 交互扣除RNA差别显示技术第23-24页
 1.4 本研究的目的、意义及研究技术路线第24-26页
  1.4.1 本研究的目的、意义第24-25页
  1.4.2 研究技术路线第25-26页
2 材料与方法第26-43页
 2.1 材料第26-27页
  2.1.1 试验材料第26-27页
  2.1.2 菌种第27页
  2.1.3 试剂第27页
 2.2 方法第27-42页
  2.2.1 玉米雄穗分化过程中各时期形态的显微观察第27页
  2.2.2 近等位基因系琼42Qms和琼42小花分化期雄穗总RNA提取及mRNA纯化第27-30页
   2.2.2.1 小花分化期雄穗总RNA提取第27-28页
   2.2.2.2 mRNA的纯化第28-30页
  2.2.3 近等位基因系42Qms和琼42差异表达分析第30-39页
   2.2.3.1 cDNA第一链合成第30页
   2.2.3.2 cDNA第二链合成第30-31页
   2.2.3.3 RsaⅠ酶切第31-32页
   2.2.3.4 连接接头第32-33页
   2.2.3.5 第一次杂交第33页
   2.2.3.6 第二次杂交第33-34页
   2.2.3.7 PCR扩增第34-36页
   2.2.3.8 PCR扩增产物的克隆及重组子的筛选第36-39页
    2.2.3.8.1 连接第36页
    2.2.3.8.2 宿主菌E.coli DH5α感受态细胞的制备第36-37页
    2.2.3.8.3 连接产物转化宿主菌E.coli DH5α感受态细胞第37页
    2.2.3.8.4 质粒的微量提取第37-38页
    2.2.3.8.5 重组子的酶切鉴定第38-39页
  2.2.4 Northen杂交分析第39-42页
   2.2.4.1 琼42和琼42Qms小花分化期、抽穗成熟期的叶片、雄穗总RNA的提取第39页
   2.2.4.2 DNA探针的制备第39-40页
    2.2.4.2.1 利用低熔点琼脂糖凝胶回收目的片段第39页
    2.2.4.2.2 DIG树己DNA第39-40页
   2.2.4.3 RNA的印迹转移第40-41页
    2.2.4.3.1 RNA甲醛电泳的准备第40页
    2.2.4.3.2 RNA电泳第40页
    2.2.4.3.3 凝胶印迹转移第40-41页
   2.2.4.4 预杂交和杂交第41页
   2.2.4.5 杂交后洗膜第41-42页
   2.2.4.6 免疫检测第42页
 2.3 测序第42-43页
3 结果与分析第43-48页
 3.1 玉米雄穗各分化时期形态的观察第43页
 3.2 小花分化期雄穗总RNA的提取第43-44页
 3.3 mRNA的纯化第44页
 3.4 近等位基因系琼42和琼42Qms的差异表达分析第44-45页
 3.5 PCR扩增产物的克隆及重组子筛选第45-46页
 3.6 Northern杂交分析第46-47页
 3.7 序列分析第47-48页
4 讨论第48-51页
 4.1 玉米雄穗各分化时期的显微观察第48-49页
 4.2 琼42和琼42Qms小花分化期雄穗总RNA的提取第49-50页
 4.3 PCR产物的克隆第50页
 4.4 近等位基因系琼42和琼42Qms差异表达分析第50页
 4.5 差异片段的序列测定及分析第50-51页
5 结论第51-52页
6 参考文献第52-61页
7 英文摘要第61-63页
8 附图第63-66页
9 致谢第66页

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