| 中文摘要 | 第1-11页 |
| 英文摘要 | 第11-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-35页 |
| 1 双歧杆菌载体系统研究进展 | 第14-17页 |
| 1．1 双歧杆菌质较 | 第14-15页 |
| 1．2 双歧杆菌质粒载体系统及研究进展 | 第15-17页 |
| 2 乳酸杆菌载体系统研究进展 | 第17-22页 |
| 2．1 乳酸杆菌质粒 | 第17-18页 |
| 2．2 乳杆菌质粒载体 | 第18-19页 |
| 2．3 乳杆菌基因工程的进展及应用 | 第19-20页 |
| 2．4 质粒结构的稳定性 | 第20页 |
| 2．5 分离的稳定性 | 第20-21页 |
| 2．6 染色体整合 | 第21页 |
| 2．7 外源基因的表达 | 第21-22页 |
| 3 乳酸乳球菌载体系统研究系统 | 第22-27页 |
| 3．1 乳球菌的主要基因克隆载体 | 第23页 |
| 3．2 表达载体 | 第23-24页 |
| 3．3 分泌载体 | 第24-25页 |
| 3．4 诱导型表达载体 | 第25-26页 |
| 3．5 食品级基因表达系统 | 第26-27页 |
| 4 枯草杆菌载体系统研究进展 | 第27-33页 |
| 4．1 克隆载体 | 第28-29页 |
| 4．1．1 基本载体 | 第28页 |
| 4．1．2 穿梭载体 | 第28-29页 |
| 4．2 表达载体 | 第29页 |
| 4．3 分泌载体 | 第29-31页 |
| 4．4 外源基因在枯草杆菌系统中的分泌表达 | 第31-33页 |
| 4．4．1 分泌表达的分子机制 | 第31-32页 |
| 4．4．2 枯草杆菌的分泌系统 | 第32-33页 |
| 5 外用生态制剂研究进展 | 第33-35页 |
| 第二章 BS9920目的突变菌株的筛选、生物学特性分析研究 | 第35-49页 |
| 1 候选菌株的确定 | 第35-36页 |
| 1．1 材料 | 第35页 |
| 1．1．1 菌种 | 第35页 |
| 1．1．2 培养基 | 第35页 |
| 1．2 方法 | 第35-36页 |
| 1．2．1 BS1．286抑菌实验 | 第35-36页 |
| 2 BS9920菌种的获得及其生物学特性分析 | 第36-42页 |
| 2．1 BS9920菌种 | 第36页 |
| 2．2 BS9920的生物学特性分析 | 第36-42页 |
| 2．2．1 形态及染色 | 第36页 |
| 2．2．2 培养特性 | 第36页 |
| 2．2．3 生化反应 | 第36-37页 |
| 2．2．4 抗生素敏感实验 | 第37页 |
| 2．2．5 BS9920质粒的检测 | 第37-38页 |
| 2．2．6 BS9920及BS1．286菌内可溶性蛋白的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第38-41页 |
| 2．2．7 BS9920活菌对几种致病菌的体外抑菌试验 | 第41页 |
| 2．2．8 不同浓度中药提取液对BS9920生长的影响 | 第41-42页 |
| 3 结果与分析 | 第42-47页 |
| 3．1 BS1．286抑菌实验结果 | 第42-43页 |
| 3．2 BS9920的生化反应 | 第43页 |
| 3．3 BS9920抗生素敏感性实验 | 第43页 |
| 3．4 BS9920质粒的检测结果 | 第43页 |
| 3．5 BS9920和BS1．286菌内可溶性蛋白的SDS-PAGE | 第43-44页 |
| 3．6 BS9920体外抑菌实验 | 第44-47页 |
| 3．7 不同浓度复合中药提取液对859920及BS1．286生长的影响 | 第47页 |
| 4 讨论 | 第47-49页 |
| 第三章 外用活菌复合生态制剂（CLP）的前期研制 | 第49-66页 |
| 1 实验材料 | 第49页 |
| 1．1 菌种 | 第49页 |
| 1．2 主要药剂 | 第49页 |
| 1．3 实验动物 | 第49页 |
| 1．4 培养基 | 第49页 |
| 1．5 主要试剂 | 第49页 |
| 2 复合生态制剂的基础研究 | 第49-55页 |
| 2．1 中药有效成分（蒽醌类）的提取 | 第49-50页 |
| 2．2 复合生态制剂（CLP）的制备 | 第50页 |
| 2．3 致病菌悬液的制备 | 第50页 |
| 2．4 复合制剂的体外抑菌实验 | 第50-51页 |
| 2．5 安全实验 | 第51页 |
| 2．6 药物刺激性实验 | 第51页 |
| 2．7 药物溶血实验 | 第51-52页 |
| 2．8 烧伤感染小鼠菌血症的检验 | 第52页 |
| 2．9 急性毒性实验 | 第52页 |
| 3．0 复合生态制剂对动物烧伤感染模型的治疗观察 | 第52-53页 |
| 3．1 复合制剂对刀割伤动物模型的治疗观察 | 第53页 |
| 3．2 复合生态制剂初步稳定性实验 | 第53-54页 |
| 3．3 复合活菌生态制剂的中试放大研究 | 第54-55页 |
| 3 结果与分析 | 第55-63页 |
| 3．1 复合制剂的体外抑菌实验 | 第55-56页 |
| 3．2 安全实验 | 第56-57页 |
| 3．3 药物刺激性实验 | 第57页 |
| 3．4 药物溶血实验 | 第57页 |
| 3．5 动物烧伤感染模型菌血症的检查 | 第57页 |
| 3．6 急性毒性实验 | 第57页 |
| 3．7 复合生态制剂对动物烫伤感染模型的治疗作用 | 第57-61页 |
| 3．8 复合制剂对刀割伤感染动物模型的治疗作用 | 第61-62页 |
| 3．9 复合生态制剂初步稳定性实验 | 第62页 |
| 4．0 复合活菌生态制剂的中试放大研究 | 第62-63页 |
| 4 讨论 | 第63-66页 |
| 第四章 枯草杆菌BS992O基因转化系统的建立 | 第66-82页 |
| 1 试验材料 | 第66-68页 |
| 1．1 基本试剂 | 第66-67页 |
| 1．2 酶和其它试利 | 第67页 |
| 1．3 仪器、物品及生产厂家 | 第67-68页 |
| 1．4 菌种 | 第68页 |
| 1．5 质粒 | 第68页 |
| 2 基本实验方法 | 第68-76页 |
| 2．1 菌种的培养与保存 | 第68-69页 |
| 2．2 质粒提取 | 第69-71页 |
| 2．3 质粒的酶切 | 第71页 |
| 2．4 琼脂糖凝胶电泳 | 第71-72页 |
| 2．5 大肠杆菌JM109感受态细胞的制备 | 第72-73页 |
| 2．6 pHY07转化大肠杆菌JM109感受态细胞 | 第73页 |
| 2．7 枯草杆菌感受态细胞的制备 | 第73-75页 |
| 2．8 穿梭型质粒载体-pHY07转化枯草杆菌BS992O | 第75页 |
| 2．9 BS9920转化子（pHY07）质粒DNA的提取、纯化及酶切鉴定 | 第75页 |
| 3．0 BS9920转化子（pHY07）的抗性Marker基因的表达检测 | 第75-76页 |
| 3．1 枯草杆菌分泌型质粒载体pUS186转化枯草杆菌BS9920 | 第76页 |
| 3．2 BS9920转化子（pUS186）质粒的提取、纯化和酶切鉴定 | 第76页 |
| 3．3 转化时间、温度对转化率的影响 | 第76页 |
| 3 结果与分析 | 第76-80页 |
| 3．1 BS9920转化子（pHY07）质粒及酶切检测 | 第76-77页 |
| 3．2 BS9920转化子（pHY07）的抗性Marker基因的表达检测 | 第77页 |
| 3．3 BS9920转化子（pUS186）质粒的提取、纯化和酶切鉴定 | 第77页 |
| 3．4 转化时间、温度对转化率的影响结果 | 第77-80页 |
| 4 讨论 | 第80-82页 |
| 第五章 人表皮生长因子（hEGF）基因的合成及在BS9920中的分泌表达 | 第82-108页 |
| 1 人表皮生长因子基因的合成 | 第82-85页 |
| 1．1 主要试剂 | 第82页 |
| 1．2 主要仪器 | 第82页 |
| 1．3 菌种及质粒 | 第82页 |
| 1．4 引物 | 第82-83页 |
| 1．5 PCR技术合成hEGF基因 | 第83-84页 |
| 1．6 DNA序列分析 | 第84-85页 |
| 2 分泌载体pUSE的构建 | 第85-87页 |
| 2．1 主要试剂 | 第85页 |
| 2．2 操作步骤 | 第85-87页 |
| 3 重组质粒pUSE转化BS9920 | 第87-95页 |
| 3．1 BS9920感受态细胞的制备 | 第87-88页 |
| 3．2 pUSE转化BS9920感受态细胞 | 第88-89页 |
| 3．3 BS9920转化子（BS9920T）的筛选 | 第89-95页 |
| 3．3．1 阳性菌落质粒的提取 | 第89-90页 |
| 3．3．2 PCR快速检测 | 第90-91页 |
| 3．3．3 PCR Southern-blot检测 | 第91-95页 |
| 4 hEGF基因在BS9920中的分泌表达 | 第95-97页 |
| 4．1 主要试剂及设备 | 第95页 |
| 4．2 放免检测BS9920T培养上清中的hEGF | 第95-96页 |
| 4．2．1 样品的制备 | 第95-96页 |
| 4．2．2 放免检测步骤 | 第96页 |
| 4．3 BS9920T培养上清中rhEGF生物学活性检测 | 第96-97页 |
| 4．3．1 主要试材 | 第96页 |
| 4．3．2 实验方法 | 第96-97页 |
| 5 结果与分析 | 第97-104页 |
| 5．1 PCR合成hEGF基因电泳检测 | 第97-98页 |
| 5．2 DNA序列分析 | 第98页 |
| 5．3 构建pUSE分泌载体 | 第98-99页 |
| 5．4 PCR法快速筛选阳性转化子 | 第99-100页 |
| 5．5 PCR Southern-blot鉴定阳性转化子 | 第100页 |
| 5．6 hEGF基因在BS9920中的分泌表达 | 第100-102页 |
| 5．7 阳性转化子培养上清的rhEGF活性检测 | 第102-104页 |
| 6 讨论 | 第104-108页 |
| 结论 | 第108-110页 |
| 创新点 | 第110-111页 |
| 附-1 | 第111-112页 |
| 参考文献 | 第112-122页 |
| 博士生在读期间论文发表情况 | 第122-123页 |
| 致 谢 | 第123页 |
