| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 一、文献综述 | 第12-22页 |
| ·MATE基因家族 | 第12-14页 |
| ·MATE基因家族的发现 | 第12-13页 |
| ·MATE基因的结构和分类 | 第13页 |
| ·MATE基因家族的功能 | 第13-14页 |
| ·植物中参与柠檬酸转运的MATE基因 | 第14-18页 |
| ·MATE基因作为柠檬酸转运蛋白参与植物铁的运输 | 第14-15页 |
| ·铁是生物体内必需的营养元素 | 第14页 |
| ·植物吸收铁的形式 | 第14-15页 |
| ·MATE基因参与铁在植物体内的运输 | 第15页 |
| ·MATE基因作为柠檬酸转运蛋白参与植物耐铝的过程 | 第15-18页 |
| ·植物铝毒害 | 第15-16页 |
| ·植物根际分泌有机酸螯合有毒铝离子是一种重要的解铝毒机制 | 第16页 |
| ·植物中转运有机酸的铝抗性基因研究进展 | 第16-18页 |
| ·植物铝抗性由多个基因控制 | 第18页 |
| ·香橙MATE基因的研究 | 第18-19页 |
| ·资阳香橙简介 | 第18-19页 |
| ·香橙MATE基因的研究 | 第19页 |
| ·紫花苜蓿耐铝研究进展 | 第19-22页 |
| ·紫花苜蓿简介 | 第19页 |
| ·基因工程在苜蓿耐铝研究中的应用 | 第19-22页 |
| 二、引言 | 第22-26页 |
| ·立论依据 | 第22-24页 |
| ·研究技术路线 | 第24-26页 |
| 三、材料和方法 | 第26-34页 |
| ·材料 | 第26-29页 |
| ·菌株和载体 | 第26页 |
| ·植物材料 | 第26页 |
| ·主要试剂 | 第26页 |
| ·主要缓冲液与培养基配方 | 第26-28页 |
| ·主要仪器设备 | 第28-29页 |
| ·方法 | 第29-34页 |
| ·拟南芥遗传转化 | 第29页 |
| ·拟南芥的种植 | 第29页 |
| ·农杆菌侵染液的制备及对拟南芥的遗传转化 | 第29页 |
| ·转基因拟南芥的筛选 | 第29页 |
| ·紫花苜蓿遗传转化 | 第29-31页 |
| ·苜蓿种子的灭菌及无菌叶片的准备 | 第29-30页 |
| ·苜蓿愈伤组织的诱导及感受态胚性愈伤悬浮液的制备 | 第30页 |
| ·农杆菌侵染液的制备及对紫花苜蓿的遗传转化 | 第30页 |
| ·转基因紫花苜蓿的GUS组织化学染色及PCR分子鉴定 | 第30-31页 |
| ·转基因苜蓿RNA提取及CjMATE基因的表达分析 | 第31-32页 |
| ·改良CTAB法提取苜蓿总RNA | 第31页 |
| ·转基因苜蓿RNA逆转录为cDNA | 第31-32页 |
| ·转基因苜蓿CjMATE基因的表达水平分析 | 第32页 |
| ·转基因植株有机酸的提取和测定及数据处理 | 第32页 |
| ·转基因植株元素含量的测定 | 第32-33页 |
| ·铝、铁元素含量的测定 | 第32-33页 |
| ·苜蓿的铝胁迫试验 | 第33-34页 |
| ·铝胁迫后植株根尖的苯胺蓝染色分析 | 第33-34页 |
| 四、结果与分析 | 第34-50页 |
| ·CjMATE与AtMATE具有较高的序列相似性 | 第34-37页 |
| ·香橙CjMATE基因的克隆及测序 | 第34-35页 |
| ·CjMATE氨基酸序列的同源性比较 | 第35-36页 |
| ·CjMATE的拓扑结构分析 | 第36-37页 |
| ·CjMATE基因的表达模式 | 第37-41页 |
| ·缺铁和铝处理条件下CjMATE基因的表达情况 | 第37-38页 |
| ·CjMATE基因的启动子分析 | 第38-41页 |
| ·CjMATE基因上游启动子元件预测 | 第38-39页 |
| ·植物表达载体构建与PCjMATE∷GUS转基因烟草植株的获得 | 第39-40页 |
| ·PCjMATE∷GUS的转基因烟草组织化学染色 | 第40-41页 |
| ·拟南芥突变体转CjMATE基因植株的互补实验 | 第41-45页 |
| ·拟南芥突变体转CjMATE基因植株的获得 | 第41-42页 |
| ·转基因植株缺铁实验 | 第42-44页 |
| ·转基因植株耐铝实验 | 第44-45页 |
| ·超量表达CjMATE基因提高苜蓿耐铝特性 | 第45-50页 |
| ·CjMATE转基因苜蓿植株的获得 | 第45-46页 |
| ·超量表达CjMATE基因苜蓿植株的筛选 | 第46-47页 |
| ·转基因苜蓿有机酸含量测定 | 第47-48页 |
| ·转基因苜蓿耐铝毒害能力的评价 | 第48页 |
| ·转基因苜蓿植株铝元素含量的测定 | 第48-50页 |
| 五、讨论 | 第50-54页 |
| ·CjMATE基因可能编码柠檬酸转运蛋白 | 第50-51页 |
| ·CjMATE基因参与植物铁的运输 | 第51-52页 |
| ·CjMATE基因参与植物耐铝过程 | 第52-54页 |
| 六、结论 | 第54-56页 |
| ·主要结论 | 第54页 |
| ·创新点 | 第54-56页 |
| 七、参考文献 | 第56-60页 |
| 八、致谢 | 第60-62页 |
| 附录 | 第62-65页 |
| 附录一、载体构建流程图 | 第62-64页 |
| 附录二、缩略词 | 第64-65页 |
| 附录三、硕士期间参与课题及发表论文 | 第65页 |
