| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 缩略语表 | 第11-12页 |
| 1 前言 | 第12-38页 |
| ·有机磷农药研究综述 | 第12-21页 |
| ·有机磷农药概述 | 第12-13页 |
| ·有机磷农药的化学组成和分类 | 第13-14页 |
| ·常用的有机磷农药的理化特性 | 第14-16页 |
| ·有机磷农药的危害性 | 第16-17页 |
| ·有机磷的作用机理 | 第17-18页 |
| ·有机磷在自然环境中的降解 | 第18-19页 |
| ·光降解 | 第18页 |
| ·碱水解 | 第18页 |
| ·植物降解 | 第18-19页 |
| ·微生物降解 | 第19页 |
| ·有机磷的降解途径 | 第19-21页 |
| ·降解有机磷的酶学研究 | 第21-30页 |
| ·OPH的酶学研究进展 | 第22-25页 |
| ·OPH的蛋白质序列和结构分析 | 第22页 |
| ·金属离子取代分析 | 第22-23页 |
| ·催化机制 | 第23-24页 |
| ·活性位点分析 | 第24-25页 |
| ·底物特异性分析 | 第25页 |
| ·其它有机磷水解酶的研究 | 第25-26页 |
| ·有机磷水解酶的基因研究 | 第26-27页 |
| ·有机磷水解酶的改造 | 第27-28页 |
| ·有机磷水解酶的应用研究进展 | 第28-30页 |
| ·重组菌的构建 | 第28页 |
| ·酶的固定化 | 第28-29页 |
| ·生物传感器的设计 | 第29-30页 |
| ·表面展示技术在有机磷降解中的应用进展 | 第30-37页 |
| ·表面展示技术简介 | 第30-31页 |
| ·表面展示锚定单元研究进展 | 第31-32页 |
| ·有机磷水解酶的表面展示系统 | 第32-33页 |
| ·表面展示有机磷水解酶的应用 | 第33-37页 |
| ·重组菌的构建 | 第33-35页 |
| ·表面展示与OPH的固定化 | 第35页 |
| ·利用表面展示筛选OPH改良的突变体 | 第35-36页 |
| ·利用表面展示的OPH构建生物传感器 | 第36页 |
| ·其它有机磷降解酶的表面展示 | 第36-37页 |
| ·课题研究的目的及意义 | 第37-38页 |
| 2 材料与方法 | 第38-52页 |
| ·实验材料 | 第38-40页 |
| ·冰核细菌筛选材料 | 第38页 |
| ·菌株与质粒 | 第38页 |
| ·聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)引物 | 第38页 |
| ·培养基 | 第38-40页 |
| ·试剂及仪器 | 第40页 |
| ·试剂 | 第40页 |
| ·主要仪器 | 第40页 |
| ·实验方法 | 第40-52页 |
| ·冰核细菌的分离及鉴定 | 第40-45页 |
| ·从植物冻伤组织中分离冰核细菌 | 第40-41页 |
| ·冰核活性测定 | 第41-42页 |
| ·冰核细菌鉴定 | 第42-43页 |
| ·16S rDNA测序分析 | 第43-45页 |
| ·大肠杆菌细胞表面展示系统的构建 | 第45-48页 |
| ·opd基因的PCR扩增 | 第45页 |
| ·酶切与酶连 | 第45-46页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备与转化 | 第46-47页 |
| ·SDS-PAGE分析 | 第47-48页 |
| ·全细胞酶活性测定 | 第48页 |
| ·表面展示OPH全细胞酶活性分析 | 第48页 |
| ·蛋白酶K敏感性实验 | 第48页 |
| ·假单胞菌表面展示体系的构建 | 第48-52页 |
| ·质粒pOpr-nopd的构建 | 第48-50页 |
| ·假单胞菌感受态制备与转化 | 第50页 |
| ·全细胞酶活条件分析 | 第50页 |
| ·SDS-PAGE电泳 方法参见2.2.2.4 | 第50页 |
| ·全细胞酶活测定 方法参见2.2.2.5 | 第50页 |
| ·蛋白酶K敏感性分析 方法参见2.2.2.7 | 第50页 |
| ·质粒稳定性与酶活稳定性分析 | 第50-52页 |
| 3 结果与分析 | 第52-69页 |
| ·冰核活性细菌的分离与鉴定 | 第52-56页 |
| ·冰核细菌的分离 | 第52页 |
| ·冰核活性细菌筛选 | 第52页 |
| ·冰核活性细菌的鉴定 | 第52-56页 |
| ·形态学观察 | 第52页 |
| ·生理生化实验 | 第52-54页 |
| ·16S rDNA PCR结果分析 | 第54-56页 |
| ·大肠杆菌表面展示体系的构建 | 第56-63页 |
| ·质粒pMPL405的构建 | 第56-58页 |
| ·全波长扫描图谱 | 第58-59页 |
| ·SDS-PAGE电泳分析 | 第59页 |
| ·全细胞酶活性分析 | 第59-62页 |
| ·表面展示的OPH细胞定位 | 第62页 |
| ·酶活性比较 | 第62-63页 |
| ·假单胞菌细胞表面展示系统的构建 | 第63-67页 |
| ·假单胞菌表达质粒pOpr-nopd的构建 | 第63页 |
| ·SDS-PAGE分析 | 第63-66页 |
| ·融合蛋白的全细胞酶活性分析 | 第66页 |
| ·OPH在细胞表面的定位分析 | 第66-67页 |
| ·质粒稳定性和酶活稳定性分析 | 第67页 |
| ·小结 | 第67-69页 |
| 4 讨论 | 第69-73页 |
| ·冰核细菌的种类及冰核蛋白的结构特点 | 第69-70页 |
| ·表面展示单元与宿主菌 | 第70-71页 |
| ·启动子POPRL | 第71-72页 |
| ·后续工作展望 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-86页 |
| 致谢 | 第86-87页 |
| 附录 | 第87页 |