| 致谢 | 第1-5页 |
| 目录 | 第5-8页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| Summary | 第10-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-55页 |
| 第一节 水稻条纹病毒分子生物学研究进展 | 第13-21页 |
| 1 RSV的基因组结构 | 第14-16页 |
| 2 RSV编码的蛋白及功能 | 第16-19页 |
| ·RdRp | 第16-17页 |
| ·可能编码的运动蛋白 | 第17页 |
| ·CP、病毒特异性蛋白 | 第17-18页 |
| ·可能的膜糖蛋白 | 第18页 |
| ·可能的抑制子蛋白 | 第18-19页 |
| 3 病毒的进化地位 | 第19-20页 |
| 4 存在的问题与展望 | 第20-21页 |
| 第二节 病毒编码的RNA沉默抑制子 | 第21-38页 |
| 1 RNA沉默简介 | 第21-22页 |
| 2 RNA沉默是植物中一种固有的抗病毒机制 | 第22-25页 |
| 3 RNA沉默抑制子的发现和多样性 | 第25-31页 |
| ·RNA沉默抑制子的发现和已鉴定的沉默抑制子 | 第25-28页 |
| ·沉默抑制子的鉴定方法 | 第28-31页 |
| 4 沉默抑制子的作用方式和抑制沉默的分子机理 | 第31-34页 |
| ·抑制siRNA的产生 | 第31-32页 |
| ·通过结合siRNA而阻碍siRNA整合入RISC | 第32-33页 |
| ·干扰系统沉默 | 第33-34页 |
| 5 沉默抑制子与病毒病症状形成的关系 | 第34-36页 |
| 6 沉默抑制子的应用 | 第36-37页 |
| ·解析RNA沉默的途径 | 第36页 |
| ·增强外源蛋白的表达 | 第36-37页 |
| 7 存在的问题与展望 | 第37-38页 |
| 第三节 植物病毒编码的运动蛋白 | 第38-44页 |
| 1 MP的几种作用形式 | 第38-40页 |
| 2 运动蛋白介导病毒细胞到细胞间运动的分子机制 | 第40-42页 |
| 3 运动蛋白在病毒长距离运输中的作用 | 第42-43页 |
| 4 运动蛋白介导的植物抗病性 | 第43-44页 |
| 第四节 本研究的目的和意义 | 第44-55页 |
| 第二章 水稻条纹病毒基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达和抗体制备 | 第55-64页 |
| 1 材料与方法 | 第55-57页 |
| ·菌株、质粒和抗体 | 第55页 |
| ·基因的克隆和原核表达载体构建 | 第55-57页 |
| ·诱导表达 | 第57页 |
| ·表达产物在变性条件下的纯化 | 第57页 |
| ·抗体制备及发病水稻及带毒灰飞虱的检测 | 第57页 |
| 2 结果与分析 | 第57-62页 |
| ·RSV编码的6个基因的克隆 | 第57-58页 |
| ·各基因的序列测定 | 第58-59页 |
| ·利用pET-32a载体在大肠杆菌中表达His融合蛋白 | 第59-60页 |
| ·蛋白纯化和抗体制备 | 第60页 |
| ·所制备蛋白多克隆抗体的应用 | 第60-62页 |
| 3 讨论 | 第62-64页 |
| 第三章 RSV编码的RNA沉默抑制子及作用机制 | 第64-98页 |
| 1 材料与方法 | 第64-80页 |
| ·材料 | 第64-65页 |
| ·载体构建 | 第65-67页 |
| ·农杆菌瞬时表达沉默诱导体系的建立和接种 | 第67-68页 |
| ·GFP荧光观察和拍照 | 第68-69页 |
| ·大量提取RNA和Northern印迹分析 | 第69-73页 |
| ·SDS-PAGE电泳和Western印迹分析 | 第73-74页 |
| ·信号传导浸润方法 | 第74页 |
| ·沉默信号回复载体构建和浸润方法 | 第74页 |
| ·重组蛋白在自然条件下的大量纯化 | 第74-75页 |
| ·GFP RNA的体外转录与探针标记 | 第75-76页 |
| ·siRNA探针标记与纯化 | 第76页 |
| ·电泳迁移率变动试验(EMSA) | 第76-77页 |
| ·烟草和水稻的遗传转化 | 第77-78页 |
| ·转基因烟草和水稻的分子鉴定 | 第78页 |
| ·NS3的亚细胞定位 | 第78-80页 |
| 2 结果与分析 | 第80-93页 |
| ·RSV编码的NS3能抑制GFP 16c本氏烟的局部沉默 | 第80-81页 |
| ·RSV编码的NS3能抑制非转基因本氏烟的局部沉默 | 第81-83页 |
| ·RSV编码的NS3突变体不能抑制局部沉默 | 第83-84页 |
| ·RSV编码的NS3蛋白可以抑制系统沉默 | 第84-85页 |
| ·NS3蛋白对GFP沉默信号传导的影响 | 第85-87页 |
| ·RSV编码的NS3蛋白不能恢复已建立的沉默 | 第87-88页 |
| ·RSV编码的NS3蛋白与GFP RNA的结合特性 | 第88-90页 |
| ·TRV接种后不能加重病害症状 | 第90页 |
| ·转NS3基因烟草和水稻的表型观察 | 第90-91页 |
| ·NS3蛋白在细胞中的定位 | 第91-93页 |
| 3 讨论 | 第93-98页 |
| 第四章 RSV编码的运动蛋白鉴定及其功能初步研究 | 第98-108页 |
| 1 材料与方法 | 第98-100页 |
| ·材料 | 第98页 |
| ·载体构建 | 第98-99页 |
| ·GUS染色方法 | 第99页 |
| ·基因枪轰击方法和共聚焦显微镜观察 | 第99页 |
| ·亚细胞定位 | 第99页 |
| ·酵母双杂交载体转化 | 第99-100页 |
| 2 结果与分析 | 第100-104页 |
| ·利用PVX运动缺陷型载体鉴定运动蛋白 | 第100-101页 |
| ·NSvc4与GFP的融合蛋白能在本氏烟细胞间运动 | 第101页 |
| ·NSvc4在洋葱表皮细胞中的定位 | 第101-102页 |
| ·NSvc4在烟草表皮细胞中的定位 | 第102页 |
| ·NSvc4在感病水稻叶片中的定位 | 第102-104页 |
| ·NSvc4与CP酵母双杂交分析 | 第104页 |
| 3 讨论 | 第104-108页 |
| 第五章 水稻条纹病毒可侵染小麦爆发小麦条纹叶枯病 | 第108-112页 |
| 1 材料与方法 | 第108-109页 |
| ·病害分离物 | 第108页 |
| ·植物总RNA的提取、RT-PCR扩增及克隆 | 第108页 |
| ·DIBA检测 | 第108页 |
| ·传毒试验 | 第108-109页 |
| ·序列分析 | 第109页 |
| 2 结果与分析 | 第109-110页 |
| ·DIBA检测结果 | 第109页 |
| ·RT-PCR检测、克隆及序列比较 | 第109-110页 |
| ·传毒试验 | 第110页 |
| 3 讨论 | 第110-112页 |
| 附录A 本论文中所用术语缩写与中英文对照 | 第112-113页 |
| 附录B 常用生化及分子生物学试剂与仪器 | 第113-114页 |
| 附录C 常用缓冲液及培养基配方 | 第114-119页 |
| 博士期间投稿和录用的文章 | 第119页 |
