| 中文摘要 | 第1-8页 |
| 英文摘要 | 第8-10页 |
| 缩略词 | 第10-12页 |
| 前言 | 第12-14页 |
| 第一部分 特异性人TGF-β1shRNA真核表达质粒的筛选 | 第14-52页 |
| 材料与方法 | 第14-33页 |
| 一、主要仪器与材料 | 第14-20页 |
| 1.主要仪器及设备 | 第14-15页 |
| 2.主要试剂、培养基及耗材 | 第15-16页 |
| 3.菌株、细胞株及质粒 | 第16-17页 |
| 4.常用试剂的配制方法 | 第17-20页 |
| 二、技术路线 | 第20-21页 |
| 三、实验方法 | 第21-33页 |
| 1.检测各个重组质粒 | 第21页 |
| 2.转染质粒的制备 | 第21-23页 |
| 3.人肺成纤维细胞培养 | 第23-24页 |
| 4.细胞转染 | 第24-25页 |
| 5.实时荧光定量PCR检测TGF-β1的mRNA含量 | 第25-31页 |
| 6.ELISA法测定细胞上清液中TGF-β1含量 | 第31-33页 |
| 结果 | 第33-39页 |
| 1.TGF-β1 shRNA真核表达质粒的鉴定 | 第33-34页 |
| 2.人肺成纤维细胞形态特征 | 第34页 |
| 3.实时荧光定量PCR定量测定TGF-β1 mRNA结果 | 第34-37页 |
| 4.ELISA法测人肺成纤维细胞上清液TGF-β1蛋白的结果 | 第37-39页 |
| 讨论 | 第39-51页 |
| 一、基因治疗肺纤维化靶点的选择 | 第39-41页 |
| 1.肺纤维化的流行病学概况及治疗现状 | 第39-40页 |
| 2.肺纤维化病因学研究得到的线索 | 第40页 |
| 3.基因靶向治疗肺纤维化的立论依据 | 第40-41页 |
| 二、RNAi效应分析 | 第41-45页 |
| 1.RNAi现象及RNAi技术 | 第41-42页 |
| 2.RNAi技术的特点及应用 | 第42-44页 |
| 3.实验结果讨论 | 第44-45页 |
| 三、实验方法的讨论 | 第45-51页 |
| 1.细胞株的选择 | 第45-46页 |
| 2.转染方法的选择 | 第46页 |
| 3.转染要点 | 第46页 |
| 4.检测时间位点的选择 | 第46-47页 |
| 5.RNA干扰效应的检测方法 | 第47-51页 |
| 结论 | 第51-52页 |
| 第二部分 干扰TGF-β1表达后对人肺成纤维细胞生长影响 | 第52-58页 |
| 一、人肺成纤维细胞各实验组形态学观察 | 第52-54页 |
| 1.材料与仪器 | 第52页 |
| 2.方法 | 第52页 |
| 3.镜下观察结果 | 第52-54页 |
| 二、台盼蓝染色检测细胞死亡数目 | 第54-56页 |
| 1.材料与仪器 | 第54页 |
| 2.方法 | 第54页 |
| 3.台盼蓝染色计数结果 | 第54-56页 |
| 三、讨论 | 第56-57页 |
| 四、结论 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-61页 |
| 附录 | 第61-65页 |
| 综述 | 第65-80页 |
| 在校期间论文发表情况 | 第80-81页 |
| 致谢 | 第81页 |
