| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-45页 |
| 前言 | 第14-15页 |
| 第一节 蛋白酶的研究进展 | 第15-24页 |
| 第二节 生物活性肽的研究进展 | 第24-35页 |
| 第三节 表面展示技术的研究进展 | 第35-41页 |
| 第四节 海洋酵母的研究进展及本研究的目的与意义 | 第41-45页 |
| 第二章 产蛋白酶海洋酵母的筛选 | 第45-59页 |
| 1 前言 | 第45页 |
| 2 材料和方法 | 第45-52页 |
| ·材料 | 第45-47页 |
| ·方法 | 第47-52页 |
| 3 结果与讨论 | 第52-58页 |
| ·产蛋白酶海洋酵母的筛选 | 第52-53页 |
| ·5株海洋酵母的鉴定 | 第53-56页 |
| ·酶解蛎虾蛋白所产活性肽的ACE抑制活力测定 | 第56-58页 |
| 4 本章小结 | 第58-59页 |
| 第三章 A.pullulans HN2-3蛋白酶的分离纯化、特性研究及酶解不同蛋白源产活性肽的研究 | 第59-79页 |
| 1 前言 | 第59-60页 |
| 2 材料和方法 | 第60-66页 |
| ·材料 | 第60-61页 |
| ·方法 | 第61-66页 |
| 3 结果与讨论 | 第66-77页 |
| ·蛋白酶发酵液浓缩及Sephadex~(TM) G-75凝胶层析部分纯化 | 第66-67页 |
| ·DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换层析柱纯化化 | 第67-69页 |
| ·不连续SDS-PAGE凝胶电泳 | 第69-70页 |
| ·纯化蛋白酶最适作用温度与温度稳定性 | 第70-72页 |
| ·纯化蛋白酶最适作用pH与pH稳定性 | 第72-73页 |
| ·金属离子对蛋白酶ALP2酶活的影响 | 第73-74页 |
| ·蛋白抑制剂对纯化蛋白酶ALP2酶活的影响 | 第74-75页 |
| ·蛋白水解产物ACE抑制活性和抗氧化活性 | 第75-77页 |
| 4 本章小结 | 第77-79页 |
| 第四章 A.pullulans HN2-3蛋白酶基因克隆与信息学分析 | 第79-112页 |
| 1 前言 | 第79-81页 |
| 2 材料和方法 | 第81-93页 |
| ·材料 | 第81-84页 |
| ·方法 | 第84-93页 |
| 3 结果和讨论 | 第93-111页 |
| ·简并PCR引物的设计 | 第93-97页 |
| ·简并PCR克隆碱性蛋白酶ALP2部分基因 | 第97-98页 |
| ·A.pullulans HN2-3基因组DNA的提取及简并PCR | 第97-98页 |
| ·简并PCR结果 | 第98页 |
| ·反向PCR获得碱性蛋白酶ALP2全部基因 | 第98-100页 |
| ·反向PCR引物设计 | 第99页 |
| ·限制性内切酶酶切基因组DNA及连接环化 | 第99页 |
| ·反向PCR | 第99-100页 |
| ·碱性蛋白酶基因ALP2生物信息学分析 | 第100-111页 |
| ·序列在NCBI的比对结果及碱性蛋白酶基因ORF框推测 | 第100-101页 |
| ·反转录PCR | 第101-105页 |
| ·碱性蛋白酶ALP2氨基酸序列分析 | 第105-111页 |
| 4 本章小结 | 第111-112页 |
| 第五章 普鲁兰短梗霉HN2-3蛋白酶基因APL2的表达 | 第112-124页 |
| 1 前言 | 第112-113页 |
| 2 材料与方法 | 第113-117页 |
| ·材料 | 第113-114页 |
| ·方法 | 第114-117页 |
| 3 结果与讨论 | 第117-123页 |
| ·受体菌的选择 | 第117-119页 |
| ·PMD19-T simple-ALP2重组质粒构建 | 第119-120页 |
| ·连接表达载体的阳性克隆的检测 | 第120-121页 |
| ·含蛋白酶基因的质粒片断转化Y.lipolytica Polh | 第121页 |
| ·转化子蛋白酶活力的测定 | 第121-123页 |
| 4 本章小结 | 第123-124页 |
| 第六章 A.pullulans HN2-3蛋白酶ALP2的表面展示及表面展示蛋白酶的特性研究 | 第124-143页 |
| 1 前言 | 第124-125页 |
| 2 材料和方法 | 第125-129页 |
| ·材料 | 第125-126页 |
| ·方法 | 第126-129页 |
| 3 结果与讨论 | 第129-141页 |
| ·蛋白酶ALP2表面展示质粒构建 | 第129-130页 |
| ·PMD19-T Vector simple-ALP2重组质粒的构建 | 第130-131页 |
| ·重组质粒pINA1317-YICPW110-ALP2的构建 | 第131-133页 |
| ·含蛋白酶基因的质粒片断转化Y.lipolytica Polh | 第133页 |
| ·免疫荧光反应 | 第133-134页 |
| ·转化子蛋白酶活力的测定 | 第134-136页 |
| ·具6×His标签的表面展示蛋白的特性研究 | 第136-141页 |
| ·表面展示蛋白酶最适作用pH与pH稳定性 | 第136-138页 |
| ·表面展示蛋白酶最适作用温度和温度稳定性 | 第138-139页 |
| ·金属离子对表面展示蛋白酶ALP2酶活的影响 | 第139页 |
| ·蛋白抑制剂对表面展示蛋白酶ALP2酶活的影响 | 第139-141页 |
| 4 本章小结 | 第141-143页 |
| 第七章 表面展示蛋白酶ALP2酶解不同蛋白源产活性肽的研究初步 | 第143-150页 |
| 1 前言 | 第143-144页 |
| 2 材料和方法 | 第144-146页 |
| ·材料 | 第144-145页 |
| ·方法 | 第145-146页 |
| 3 结果与讨论 | 第146-149页 |
| ·蛋白水解产物抑制ACE活性与抗氧化活性 | 第146-148页 |
| ·表面展示蛋白酶使用周期的测定 | 第148-149页 |
| 4 本章小结 | 第149-150页 |
| 参考文献 | 第150-162页 |
| 总结与创新点 | 第162-164页 |
| 发表的学术论文 | 第164-165页 |
| 附录 | 第165-167页 |
| 致谢 | 第167页 |
