| 致谢 | 第1-11页 |
| 摘要 | 第11-13页 |
| Abstract | 第13-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-34页 |
| 1 植物与盐胁迫 | 第16-17页 |
| ·盐胁迫对植物的影响 | 第16-17页 |
| ·渗透胁迫 | 第16-17页 |
| ·离子胁迫 | 第17页 |
| ·营养胁迫 | 第17页 |
| 2 植物耐盐的生理机制 | 第17-21页 |
| ·Na~+外排 | 第17-18页 |
| ·Na~+区隔化 | 第18页 |
| ·拒盐 | 第18页 |
| ·合成渗透调节物质 | 第18-20页 |
| ·脯氨酸 | 第19页 |
| ·甜菜碱 | 第19-20页 |
| ·多元醇 | 第20页 |
| ·水通道蛋白 | 第20页 |
| ·胚胎后期表达蛋白(LEA蛋白) | 第20-21页 |
| 3 调控Na~+均衡的离子转运系统 | 第21-32页 |
| ·SOS调控途径 | 第21-26页 |
| ·SOS3基因的定位与表达 | 第22-23页 |
| ·SOS2基因的定位与表达 | 第23-24页 |
| ·SOS1基因的定位与表达 | 第24-25页 |
| ·SOS基因和植物耐盐的调控途径 | 第25-26页 |
| ·NHX途径 | 第26-31页 |
| ·NHX的分类及亚细胞定位 | 第26-28页 |
| ·NHX家族离子转运功能的特异性 | 第28-30页 |
| ·拟南芥AtNHX1的功能研究进展 | 第30-31页 |
| ·H~+-ATPase(质子泵)基因 | 第31-32页 |
| 4 小麦与盐胁迫 | 第32-34页 |
| 第二章 小麦质膜Na~+/H~+逆转运蛋白TaSOS1的克隆与表达分析 | 第34-48页 |
| 1 材料和方法 | 第34-39页 |
| ·植物材料 | 第34-35页 |
| ·实验方法 | 第35-39页 |
| ·RNA提取 | 第35页 |
| ·反转录反应 | 第35页 |
| ·TaSOS1基因的克隆 | 第35-38页 |
| ·引物序列 | 第35-36页 |
| ·PCR反应体系及条件 | 第36页 |
| ·TaSOS1与T-载体的连接 | 第36页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第36-37页 |
| ·质粒DNA提取 | 第37-38页 |
| ·实时荧光定量PCR(RT-PCR) | 第38-39页 |
| ·引物序列 | 第38页 |
| ·RT-PCR反应体系及条件 | 第38-39页 |
| 2 结果与分析 | 第39-46页 |
| ·TaSOS1的克隆及生物信息学分析 | 第39-41页 |
| ·TaSOS1的克隆 | 第39页 |
| ·TaSOS1的生物信息学分析 | 第39-41页 |
| ·TaSOS1在各种胁迫条件下的表达量分析 | 第41-46页 |
| ·RNA及cDNA检测 | 第41-42页 |
| ·标准曲线的建立 | 第42-43页 |
| ·熔解曲线 | 第43-44页 |
| ·TaSOS1基因在各种胁迫处理下的特异性表达 | 第44-46页 |
| ·NaCl胁迫条件下TaSOS1基因的表达模式 | 第44页 |
| ·4℃低温胁迫条件下TaSOS1基因的表达模式 | 第44-45页 |
| ·ABA胁迫条件下TaSOS1基因的表达模式 | 第45页 |
| ·PEG6000胁迫条件下TaSOS1基因的表达模式 | 第45-46页 |
| 3 讨论 | 第46-48页 |
| 第三章 TaSOS1在酵母中的功能分析 | 第48-64页 |
| 1 材料与方法 | 第48-54页 |
| ·TaSOS1转化酵母细胞 | 第48-51页 |
| ·酵母表达载体的构建 | 第48-49页 |
| ·实验中所用酵母培养基及氨基酸 | 第49页 |
| ·酵母菌株及酵母表达载体 | 第49页 |
| ·PEG4000-LiAc法化学转化酵母细胞 | 第49-50页 |
| ·酵母细胞DNA的提取 | 第50页 |
| ·转基因酵母的PCR检测 | 第50-51页 |
| ·酵母梯度点滴生长实验 | 第51页 |
| ·酵母细胞内离子含量测定 | 第51-52页 |
| ·酵母细胞质膜的提取 | 第52-53页 |
| ·粗膜制剂的获得 | 第52页 |
| ·两相系统的制备 | 第52-53页 |
| ·膜蛋白含量测定 | 第53页 |
| ·质膜纯度检测 | 第53页 |
| ·Na~+/H~+离子交换活性测定 | 第53-54页 |
| 2 结果与分析 | 第54-60页 |
| ·酵母功能互补验证 | 第54-56页 |
| ·酵母细胞Na~+、K~+离子含量测定 | 第56-57页 |
| ·质膜纯度测定 | 第57-58页 |
| ·Na~+/H~+交换活性测定 | 第58-60页 |
| 3 讨论 | 第60-64页 |
| ·盐胁迫条件转TaSOS1基因的酵母耐盐性 | 第60-61页 |
| ·转TaSOS1基因酵母对潮霉素B的耐逆性 | 第61页 |
| ·盐胁迫条件下转TaSOS1基因的酵母细胞内Na~+、K~+离子含量 | 第61-62页 |
| ·转TaSOS1基因酵母质膜的Na~+/H~+离子转运活性 | 第62-64页 |
| 第四章 小麦液泡膜Na~+/H~+逆转运蛋白TaNHX2的克隆与功能分析 | 第64-82页 |
| 1 材料与方法 | 第65-72页 |
| ·植物材料 | 第65页 |
| ·实验方法 | 第65-72页 |
| ·TaNHX2基因的克隆 | 第65-66页 |
| ·小麦总RNA提取及反转录反应 | 第65页 |
| ·RT-PCR | 第65-66页 |
| ·酵母功能互补验证 | 第66-68页 |
| ·酵母菌株 | 第66页 |
| ·酵母表达载体 | 第66-67页 |
| ·实验中所用酵母培养基及氨基酸 | 第67页 |
| ·TaNHX2亚克隆载体的构建 | 第67页 |
| ·转化酵母 | 第67页 |
| ·酵母梯度点滴生长实验 | 第67-68页 |
| ·酵母液泡膜的提取 | 第68页 |
| ·膜蛋白含量测定 | 第68页 |
| ·Western Blotting | 第68-70页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第68-69页 |
| ·Western转膜 | 第69-70页 |
| ·胁迫条件下酵母细胞内Na~+、K~+离子含量测定 | 第70页 |
| ·酵母细胞中完整液泡膜的分离 | 第70-72页 |
| ·构建酵母表达载体pDR195-TaNHX2 | 第70-71页 |
| ·转化酵母突变体OCO2 | 第71页 |
| ·液泡膜的提取 | 第71-72页 |
| ·Cation/H~+交换活性测定 | 第72页 |
| 2 结果与分析 | 第72-79页 |
| ·TaNHX2的克隆 | 第72-73页 |
| ·TaNHX2的生物信息学分析 | 第73-74页 |
| ·Western Blot分析 | 第74页 |
| ·酵母功能互补验证 | 第74-76页 |
| ·转基因酵母Na~+、K~+离子含量测定 | 第76-77页 |
| ·Cation/H~+交换活性 | 第77-79页 |
| 3 讨论 | 第79-82页 |
| ·TaNHX2的信息学分析 | 第79页 |
| ·TaNHX2在酵母中的耐盐性分析 | 第79-80页 |
| ·TaNHX2的离子转运活性 | 第80-82页 |
| 参考文献 | 第82-92页 |
| 攻读博士学位期间整理发表的论文 | 第92页 |
