| 目录 | 第1-14页 |
| 致谢 | 第14-16页 |
| 术语和缩略语表 | 第16-19页 |
| 摘要 | 第19-21页 |
| ABSTRACT | 第21-23页 |
| 第一章 前言 | 第23-45页 |
| 1 免疫分析技术在农药残留检测中的应用 | 第25-26页 |
| 2 基因工程抗体 | 第26-36页 |
| ·基因工程抗体的分类 | 第26-29页 |
| ·人源化抗体 | 第27页 |
| ·小分子抗体 | 第27-28页 |
| ·双(多)价抗体 | 第28页 |
| ·双特异抗体 | 第28页 |
| ·抗体融合蛋白 | 第28-29页 |
| ·抗体库技术 | 第29页 |
| ·基因工程抗体的表达 | 第29-31页 |
| ·哺乳动物细胞表达系统 | 第30页 |
| ·大肠杆菌表达系统 | 第30页 |
| ·酵母和昆虫细胞表达体系 | 第30-31页 |
| ·动植物表达系统 | 第31页 |
| ·包涵体的分离、变性及复性 | 第31-34页 |
| ·包涵体的分离及变性 | 第32页 |
| ·包涵体的复性 | 第32-34页 |
| ·基因工程抗体在农药残留检测方面的研究进展 | 第34-36页 |
| 3 分子间相互作用 | 第36-43页 |
| ·蛋白质结构预测方法 | 第36-40页 |
| ·同源建模法 | 第37-38页 |
| ·折叠识别法 | 第38-39页 |
| ·从头预测法 | 第39-40页 |
| ·分子对接 | 第40-43页 |
| ·分子对接的基本步骤 | 第40-41页 |
| ·分子对接方法的分类 | 第41页 |
| ·分子对接的模拟方法 | 第41-43页 |
| ·计算机模拟在抗体与农药小分子相互作用方面的应用 | 第43页 |
| 4 研究目的和意义 | 第43-45页 |
| 第二章 抗三唑磷基因工程抗体亲本杂交瘤细胞株的筛选 | 第45-72页 |
| 1 引言 | 第45页 |
| 2 材料与方法 | 第45-52页 |
| ·实验材料 | 第45-49页 |
| ·试剂与药品 | 第46-47页 |
| ·缓冲液 | 第47-48页 |
| ·仪器与设备 | 第48-49页 |
| ·实验动物 | 第49页 |
| ·实验方法 | 第49-52页 |
| ·半抗原的合成和免疫抗原、包被抗原、酶标半抗原的制备 | 第49页 |
| ·抗三唑磷单克隆抗体的制备 | 第49-50页 |
| ·直接竞争ELISA方法的建立 | 第50页 |
| ·抗原—抗体工作浓度选择 | 第50页 |
| ·抗体亲和力和检测灵敏度 | 第50页 |
| ·ELISA方法优化 | 第50-51页 |
| ·不同盐离子浓度对ELISA反应的影响 | 第50-51页 |
| ·pH对ELISA反应的影响 | 第51页 |
| ·添加剂对ELISA反应的影响 | 第51页 |
| ·有机溶剂对ELISA反应的影响 | 第51页 |
| ·底物的选择 | 第51页 |
| ·ELISA方法验证 | 第51-52页 |
| ·方法的特异性 | 第51-52页 |
| ·方法的准确性试验 | 第52页 |
| ·样品前处理方法 | 第52页 |
| 3 结果与分析 | 第52-69页 |
| ·三唑磷半抗原 | 第52-53页 |
| ·抗体效价测定 | 第53页 |
| ·ELISA方法建立 | 第53-54页 |
| ·ELISA方法优化 | 第54-59页 |
| ·离子浓度对抗原抗体结合反应的影响 | 第55-56页 |
| ·pH值的影响 | 第56页 |
| ·添加剂的影响 | 第56-57页 |
| ·有机溶剂的影响 | 第57-58页 |
| ·底物 | 第58-59页 |
| ·ELISA方法验证 | 第59-69页 |
| ·抗体的特异性 | 第59-60页 |
| ·方法的准确性试验 | 第60-69页 |
| 4 小结与讨论 | 第69-72页 |
| ·小结 | 第69页 |
| ·讨论 | 第69-72页 |
| 第三章 抗三唑磷ScFv基因构建及其在大肠杆菌的表达和初步鉴定 | 第72-97页 |
| 1 引言 | 第72页 |
| 2 材料与方法 | 第72-84页 |
| ·实验材料 | 第72-76页 |
| ·试剂与药品 | 第72-73页 |
| ·缓冲液 | 第73-74页 |
| ·仪器与设备 | 第74-75页 |
| ·细胞株和宿主菌 | 第75-76页 |
| ·实验方法 | 第76-84页 |
| ·引物设计与合成 | 第76-77页 |
| ·抗体可变区引物设计 | 第76页 |
| ·ScFv基因构建引物 | 第76-77页 |
| ·内参引物 | 第77页 |
| ·总RNA的提取 | 第77-78页 |
| ·RNA的变性琼脂糖凝胶检测 | 第78页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第78页 |
| ·cDNA检测 | 第78页 |
| ·抗体可变区基因扩增 | 第78-79页 |
| ·可变区基因纯化、回收 | 第79页 |
| ·超级感受态大肠杆菌的制备 | 第79-80页 |
| ·可变区基因克隆 | 第80-81页 |
| ·T载体连接 | 第80页 |
| ·转化 | 第80页 |
| ·阳性菌落的筛选、质粒提取 | 第80-81页 |
| ·重组V_H/V_L质粒鉴定 | 第81页 |
| ·PCR鉴定 | 第81页 |
| ·测序鉴定 | 第81页 |
| ·DNA序列计算机分析 | 第81页 |
| ·抗三唑磷ScFv基因的构建 | 第81-82页 |
| ·ScFv基因的回收、克隆及重组质粒的鉴定 | 第82页 |
| ·抗三唑磷ScFv重组表达质粒(pET-Tap-ScFv)的构建 | 第82页 |
| ·表达质粒转化 | 第82-83页 |
| ·阳性菌落的筛选 | 第83页 |
| ·抗三唑磷ScFv基因的诱导表达 | 第83页 |
| ·表达抗体的变性与复性 | 第83-84页 |
| ·抗三唑磷ScFv活性鉴定 | 第84页 |
| 3 结果与分析 | 第84-94页 |
| ·总RNA的提取 | 第84-85页 |
| ·β-肌动蛋白基因序列扩增 | 第85-86页 |
| ·可变区基因的扩增 | 第86页 |
| ·可变区基因的克隆与鉴定 | 第86-87页 |
| ·V_H和V_L序列分析 | 第87-88页 |
| ·ScFv基因的构建 | 第88-89页 |
| ·ScFv基因的克隆和鉴定 | 第89-90页 |
| ·ScFv重组表达质粒的构建、转化及阳性转化菌的筛选 | 第90-91页 |
| ·抗三唑磷ScFv在大肠杆菌的表达 | 第91-93页 |
| ·表达蛋白变性、纯化与复性 | 第93页 |
| ·抗三唑磷ScFv免疫活性鉴定 | 第93-94页 |
| 4 小结与讨论 | 第94-97页 |
| ·小结 | 第94页 |
| ·讨论 | 第94-97页 |
| 第四章 抗三唑磷单链抗体(ScFv)三级结构同源建模 | 第97-114页 |
| 1 引言 | 第97页 |
| 2 材料与方法 | 第97-99页 |
| ·实验材料 | 第97-98页 |
| ·氨基酸序列 | 第97-98页 |
| ·软件及模块 | 第98页 |
| ·实验方法 | 第98-99页 |
| 3 结果与分析 | 第99-110页 |
| ·V_H链空间结构建模 | 第99-101页 |
| ·同源蛋白序列搜索 | 第99页 |
| ·序列比对 | 第99-100页 |
| ·同源建模 | 第100-101页 |
| ·模型评价 | 第101页 |
| ·V_L链空间结构建模 | 第101-103页 |
| ·同源蛋白序列搜索 | 第101页 |
| ·序列比对 | 第101-102页 |
| ·同源建模 | 第102页 |
| ·模型评价 | 第102-103页 |
| ·抗三唑磷ScFv空间结构建模 | 第103-108页 |
| ·VH-VL模板分子搜索 | 第103页 |
| ·V_H和V_L链与模板分子叠合 | 第103-104页 |
| ·加连接肽(G_4S)_3 | 第104-105页 |
| ·抗三唑磷ScFv三维模型评价 | 第105页 |
| ·抗三唑磷三维模型动力学优化 | 第105-108页 |
| ·抗三唑磷ScFv与农药分子相互作用 | 第108-110页 |
| 4 小结与讨论 | 第110-114页 |
| ·小结 | 第110-111页 |
| ·讨论 | 第111-114页 |
| 第五章 后续工作进展及全文总结 | 第114-127页 |
| 1 后续工作 | 第114-125页 |
| ·抗三唑磷dsFv的研制 | 第114-119页 |
| ·实验材料 | 第114-116页 |
| ·试剂与药品 | 第114页 |
| ·缓冲液 | 第114-115页 |
| ·仪器与设备 | 第115页 |
| ·宿主菌 | 第115页 |
| ·软件 | 第115-116页 |
| ·实验方法 | 第116-119页 |
| ·氨基酸序列编码 | 第116页 |
| ·引物设计 | 第116-117页 |
| ·重链可变区基因扩展 | 第117页 |
| ·轻链可变区基因扩展 | 第117-118页 |
| ·可变区基因克隆与鉴定 | 第118-119页 |
| ·抗三唑磷dsFv同源建模 | 第119-123页 |
| ·材料与方法 | 第119-120页 |
| ·氨基酸序列 | 第119-120页 |
| ·软件 | 第120页 |
| ·方法 | 第120页 |
| ·结果与分析 | 第120-123页 |
| ·抗三唑磷dsFv空间结构建模及评价 | 第120-121页 |
| ·抗三唑磷dsFv与农药分子相互作用 | 第121-123页 |
| ·小结与讨论 | 第123-125页 |
| ·小结 | 第123-124页 |
| ·讨论 | 第124-125页 |
| 2 全文总结 | 第125页 |
| 3 全文创新点 | 第125-126页 |
| 4 不足与展望 | 第126-127页 |
| 参考文献 | 第127-141页 |
| 作者简历 | 第141页 |
