| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-8页 |
| 第1章 绪论 | 第8-18页 |
| ·课题背景及研究的目的和意义 | 第8页 |
| ·国内外在该方向的研究现状及分析 | 第8-18页 |
| ·肿瘤新基因的研究方法 | 第8-10页 |
| ·蛋白质原核表达系统介绍 | 第10-14页 |
| ·蛋白质-蛋白质相互作用的研究方法 | 第14-15页 |
| ·多克隆抗体制备的方法 | 第15-18页 |
| 第2章 材料与方法 | 第18-34页 |
| ·实验材料 | 第18-22页 |
| ·菌株 | 第18页 |
| ·细胞系 | 第18页 |
| ·载体质粒 | 第18页 |
| ·各种酶类、试剂盒和特殊进口试剂 | 第18-19页 |
| ·常用缓冲液及其他溶液 | 第19-21页 |
| ·培养基 | 第21页 |
| ·引物合成及DNA序列测定 | 第21页 |
| ·主要仪器设备 | 第21-22页 |
| ·主要软件 | 第22页 |
| ·实验方法 | 第22-33页 |
| ·质粒的转化及提取 | 第22-24页 |
| ·PCR扩增mP24 ORF片段 | 第24页 |
| ·引物设计 | 第24-25页 |
| ·重组质粒的构建-双酶切 | 第25页 |
| ·重组质粒的构建-双酶切产物的连接及转化 | 第25-26页 |
| ·阳性克隆筛选 | 第26页 |
| ·重组质粒的测序 | 第26-27页 |
| ·预表达融合蛋白 | 第27-28页 |
| ·大量表达可溶性融合蛋白 | 第28页 |
| ·纯化融合蛋白 | 第28-29页 |
| ·多克隆抗体的制备 | 第29页 |
| ·Western Blot | 第29-30页 |
| ·ELISA 检测抗体效价 | 第30页 |
| ·细胞培养及相关真核表达蛋白的获取 | 第30-32页 |
| ·GST-Pull Dowm实验 | 第32页 |
| ·多克隆抗体的纯化 | 第32-33页 |
| ·本章小结 | 第33-34页 |
| 第3章 MP24 蛋白的相互作用分子研究 | 第34-40页 |
| ·引言 | 第34页 |
| ·MP24 的原核表达重组体的构建 | 第34-35页 |
| ·PCR扩增mP24 基因 | 第34-35页 |
| ·重组体插入片段的验证 | 第35页 |
| ·MP24 在原核中的表达及纯化 | 第35-38页 |
| ·mP24 基因在大肠杆菌Rosetta（DE3）中的表达 | 第35-37页 |
| ·融合蛋白mP24-GST的纯化 | 第37-38页 |
| ·融合蛋白MP24-GST的相互作用蛋白检测 | 第38页 |
| ·讨论 | 第38-39页 |
| ·本章小结 | 第39-40页 |
| 第4章 MP24 蛋白的多克隆抗体的制备 | 第40-47页 |
| ·引言 | 第40页 |
| ·PET-28A(+)/MP24 原核表达载体的构建及测序 | 第40页 |
| ·融合蛋白的表达及纯化 | 第40-42页 |
| ·MP24 基因表达产物多克隆抗体的制备及检验 | 第42-44页 |
| ·讨论 | 第44-45页 |
| ·本章小结 | 第45-47页 |
| 结论 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-51页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文及其它成果 | 第51-53页 |
| 致谢 | 第53页 |