| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 1 前言 | 第9-23页 |
| ·根瘤菌与豆科植物的共生固氮作用 | 第9-10页 |
| ·根瘤菌中参与结瘤的基因 | 第10-12页 |
| ·调节基因 | 第11页 |
| ·共同结瘤基因 | 第11页 |
| ·宿主专一性基因 | 第11-12页 |
| ·结瘤因子 | 第12-13页 |
| ·豆科植物中结瘤因子信号转导途径 | 第13-18页 |
| ·百脉根结瘤因子受体基因 | 第14页 |
| ·共生受体样激酶基因 | 第14-15页 |
| ·离子通道蛋白 | 第15页 |
| ·依赖于钙和钙调素的蛋白激酶 | 第15页 |
| ·结瘤信号通道基因 | 第15-18页 |
| ·酵母双杂交系统 | 第18-21页 |
| ·酵母双杂交技术的优点 | 第19页 |
| ·酵母双杂交技术存在的问题 | 第19-20页 |
| ·酵母单杂交技术的原理 | 第20-21页 |
| ·本实验的研究目的、意义、内容和技术路线 | 第21-23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-35页 |
| ·材料 | 第23-26页 |
| ·菌株与质粒 | 第23-24页 |
| ·培养基 | 第24页 |
| ·PCR引物 | 第24-25页 |
| ·缓冲液和反应试剂 | 第25-26页 |
| ·酵母双杂交相关试剂 | 第25页 |
| ·蛋白质纯化试剂 | 第25-26页 |
| ·Western Blotting试剂 | 第26页 |
| ·主要分子生物学试剂 | 第26页 |
| ·方法 | 第26-35页 |
| ·基本分子生物学操作方法 | 第26页 |
| ·DNA体外重组方法 | 第26页 |
| ·DNA其它操作方法 | 第26页 |
| ·RT-PCR反应 | 第26-27页 |
| ·反转录反应 | 第26-27页 |
| ·PCR反应 | 第27页 |
| ·已知基因的克隆 | 第27-28页 |
| ·GAL4 BD-NSP2诱饵质粒的构建及检测 | 第28-29页 |
| ·NSP2基因构建 | 第28页 |
| ·诱饵蛋白转录激活活性的检测 | 第28-29页 |
| ·滤纸平板影印 | 第29页 |
| ·β-半乳糖苷酶活性检测 | 第29页 |
| ·LiAc法转化酵母 | 第29-30页 |
| ·酵母单杂交检测NSP2蛋白与DNA的相互作用 | 第30页 |
| ·百脉根Y2H-AD-cDNA文库的筛选 | 第30-31页 |
| ·菌落PCR | 第31页 |
| ·酵母质粒的抽提 | 第31-32页 |
| ·蛋白质纯化 | 第32-33页 |
| ·靶蛋白诱导表达 | 第32-33页 |
| ·融合蛋白质的纯化 | 第33页 |
| ·Western Blotting | 第33-35页 |
| 3 结果与分析 | 第35-48页 |
| ·百脉根NSP1和NSP2基因克隆及酵母表达载体的构建 | 第35页 |
| ·百脉根NSP2在酵母中具有转录激活作用 | 第35-36页 |
| ·百脉根NSP2不同结构域缺失突变体的构建 | 第36-39页 |
| ·百脉根NSP1和NSP2具有结合NIN基因启动子的能力 | 第39-40页 |
| ·NSP2蛋白相互作用靶基因的筛选 | 第40-42页 |
| ·体内确定NSP2-1与IPN2的相互作用 | 第42页 |
| ·体内确定NSP2与IPN2相互作用结构域 | 第42-43页 |
| ·IPN2基因的相关研究 | 第43-46页 |
| ·原核表达纯化蛋白IPN2 | 第46页 |
| ·体外验证IPN2与NSP2蛋白间相互作用 | 第46-48页 |
| 4 总结与讨论 | 第48-51页 |
| ·总结 | 第48-49页 |
| ·讨论 | 第49-51页 |
| 参考文献 | 第51-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 论文发表情况 | 第58页 |