| 缩略语表 | 第8-12页 |
| 中文摘要 | 第12-17页 |
| ABSTRACT | 第17-23页 |
| 前言 | 第24-27页 |
| 文献回顾 | 第27-51页 |
| 1. 恶性肿瘤的能量代谢重编程 | 第28-33页 |
| 1.1 肿瘤细胞糖酵解 | 第28-30页 |
| 1.2 谷氨酰胺的代谢改变 | 第30-32页 |
| 1.3 其它氨基酸代谢 | 第32-33页 |
| 2. 肿瘤的微环境变化 | 第33-41页 |
| 2.1 低氧微环境 | 第35页 |
| 2.2 胞外酸性微环境 | 第35-36页 |
| 2.3 炎症 | 第36-37页 |
| 2.4 纤维化微环境 | 第37-38页 |
| 2.5 免疫 | 第38-39页 |
| 2.6 间质高压 | 第39-40页 |
| 2.7 重编程与微环境的关系 | 第40-41页 |
| 3. 肿瘤酸性微环境与耐酸机制 | 第41-46页 |
| 3.1 酸性胞外微环境的产生 | 第41-43页 |
| 3.2 酸性微环境的维持和肿瘤耐酸机制 | 第43-45页 |
| 3.3 对肿瘤的影响 | 第45-46页 |
| 3.4 PET技术与Gln | 第46页 |
| 4. Gls与肿瘤关系 | 第46-50页 |
| 4.1 Gls分型与基因组定位 | 第46-47页 |
| 4.2 Gls与肿瘤 | 第47页 |
| 4.3 Gls的调控 | 第47-50页 |
| 5. 小结 | 第50-51页 |
| 第一部分 肝癌细胞的恶性生物学行为高度依赖谷氨酰胺 | 第51-59页 |
| 1 材料 | 第51-52页 |
| 1.1 主要试剂 | 第51-52页 |
| 1.2 主要仪器 | 第52页 |
| 2 方法 | 第52-54页 |
| 2.1 不同条件的培养基配制 | 第52页 |
| 2.2 不同条件下肿瘤细胞的Gln及Glc缺失耐受 | 第52-53页 |
| 2.3 肿瘤细胞的Gln浓度依赖实验 | 第53页 |
| 2.4 侵袭实验 | 第53页 |
| 2.5 迁移实验 | 第53-54页 |
| 2.6 统计方法 | 第54页 |
| 3 结果 | 第54-57页 |
| 3.1 Gln与Glc对肝癌细胞系的增殖均不可或缺 | 第54-55页 |
| 3.2 肝癌细胞系增殖对Gln的浓度依赖 | 第55-56页 |
| 3.3 Gln促进肝癌细胞系侵袭能力 | 第56页 |
| 3.4 Gln促进肝癌细胞系迁移能力 | 第56-57页 |
| 4 讨论 | 第57-59页 |
| 第二部分 Gls1及Gls2的组织分布规律 | 第59-66页 |
| 1 材料 | 第59-60页 |
| 1.1 主要试剂 | 第59-60页 |
| 2 方法 | 第60-61页 |
| 2.1 免疫组织化学染色 | 第60页 |
| 2.2 评级与评分 | 第60页 |
| 2.3 Western blotting检测组织Gls1及Gls2蛋白表达水平 | 第60页 |
| 2.4 统计方法 | 第60-61页 |
| 3 结果 | 第61-65页 |
| 3.1 Gls1及Gls2在不同肝脏疾病中的表达 | 第61-62页 |
| 3.2 Gls1及Gls2在肝癌中的表达 | 第62-64页 |
| 3.3 Gls1及Gls2的蛋白印迹检测 | 第64-65页 |
| 4 讨论 | 第65-66页 |
| 第三部分 Gls1通过介导谷氨酰胺分解代谢促进肝癌细胞获取耐酸能力 | 第66-85页 |
| 1 材料 | 第66-67页 |
| 1.1 主要试剂 | 第66页 |
| 1.2 siRNA的设计与合成 | 第66-67页 |
| 1.3 主要仪器 | 第67页 |
| 2 方法 | 第67-68页 |
| 2.1 不同条件的培养基配制 | 第67页 |
| 2.2 siRNA抑制Gls1表达 | 第67页 |
| 2.3 细胞活力检测 | 第67-68页 |
| 2.4 统计方法 | 第68页 |
| 3. 结果 | 第68-84页 |
| 3.1 Gln分解产物不能有效恢复细胞增殖 | 第68-71页 |
| 3.2 Gln可促进肝癌细胞系胞外酸性微环境产生 | 第71-72页 |
| 3.3 缺失Gln导致肝癌细胞系耐酸能力下降 | 第72-74页 |
| 3.4 si-Gls1后肝癌细胞系的耐酸能力下降 | 第74-77页 |
| 3.5 小分子抑制剂抑制Gls1活性后肝癌细胞系耐酸能力下降 | 第77-80页 |
| 3.6 Gln促进肝癌细胞系耐酸是由Gls1所介导 | 第80-84页 |
| 4 讨论 | 第84-85页 |
| 第四部分 抑制Gls1可降低酸性微环境下肝癌细胞恶性行为 | 第85-99页 |
| 1 材料 | 第85-86页 |
| 1.1 主要试剂 | 第85-86页 |
| 1.2 主要仪器 | 第86页 |
| 2 方法 | 第86页 |
| 2.1 不同条件的培养基配制 | 第86页 |
| 2.2 pHe的检测 | 第86页 |
| 2.3 不同培养条件下的细胞增殖 | 第86页 |
| 2.4 统计方法 | 第86页 |
| 3 结果 | 第86-97页 |
| 3.1 抑制Gls1阻止肝癌细胞系胞外酸性微环境产生 | 第86-88页 |
| 3.2 去除Gln进一步降低酸性环境下肝癌细胞系侵袭能力 | 第88-90页 |
| 3.3 抑制Gls1进一步降低酸性环境下肝癌细胞系侵袭能力 | 第90-92页 |
| 3.4 去除Gln进一步降低酸性环境下肝癌细胞系迁移能力 | 第92-94页 |
| 3.5 抑制Gls1进一步降低酸性环境下肝癌细胞系迁移能力 | 第94-97页 |
| 4 讨论 | 第97-99页 |
| 第五部分 Gls1小分子抑制剂对联合化学诱导小鼠原位肝癌的治疗作用 | 第99-111页 |
| 1 材料 | 第99-100页 |
| 1.1 主要试剂 | 第99-100页 |
| 2. 方法 | 第100页 |
| 2.1 肝癌小鼠模型的建立 | 第100页 |
| 2.2 血生化分析 | 第100页 |
| 2.3 Western blotting检测 | 第100页 |
| 2.4 统计方法 | 第100页 |
| 3 结果 | 第100-109页 |
| 3.1 联合化学法诱导肝癌小鼠模型的建立 | 第100-102页 |
| 3.2 应用Gls1抑制剂后的病理变化 | 第102-104页 |
| 3.3 应用Gls1抑制剂后Gls1及Gls2的蛋白水平变化 | 第104-105页 |
| 3.4 应用Gls1抑制剂后的生理指标变化 | 第105-109页 |
| 4 讨论 | 第109-111页 |
| 第六部分 临床患者肝癌组织中Gls1的DNA甲基化水平变化规律 | 第111-117页 |
| 1 材料 | 第111-112页 |
| 1.1 主要试剂 | 第111-112页 |
| 2. 方法 | 第112页 |
| 2.1 位点的选择与引物合成 | 第112页 |
| 2.2 甲基化检测 | 第112页 |
| 2.3 统计方法 | 第112页 |
| 3 结果 | 第112-115页 |
| 3.1 Gls1的甲基化检测位点选择 | 第112-114页 |
| 3.2 Gls1的甲基化水平改变 | 第114-115页 |
| 4 讨论 | 第115-117页 |
| 小结 | 第117-118页 |
| 参考文献 | 第118-134页 |
| 附录 | 第134-135页 |
| 个人简历和研究成果 | 第135-137页 |
| 致谢 | 第137-138页 |
