| 致谢 | 第1-7页 |
| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 图表清单 | 第11-13页 |
| 缩写、术语表 | 第13-15页 |
| 目次 | 第15-19页 |
| 第一章 绪论 | 第19-45页 |
| ·TSC1/2-MTORC1信号通路 | 第19-27页 |
| ·TSC1和TSC2肿瘤抑制基因 | 第19-21页 |
| ·TOR的发现 | 第21页 |
| ·mTOR蛋白的结构域组成的特征 | 第21-22页 |
| ·mTOR复合体的组成 | 第22页 |
| ·mTORC1和mTORC2信号通路的区别 | 第22-23页 |
| ·mTORC1受生子因子调控的分子机理 | 第23-24页 |
| ·mTORC1受氨基酸调控的分子机理 | 第24-25页 |
| ·低能量等细胞生存压力对mTORC1的调节 | 第25-26页 |
| ·mTORC1调节蛋白质合成的主要途径 | 第26页 |
| ·mTORC1调节细胞内的自噬的机理 | 第26-27页 |
| ·内质网压力 | 第27-29页 |
| ·内质网的功能 | 第27-28页 |
| ·内质网压力 | 第28页 |
| ·内质网应激反应 | 第28-29页 |
| ·本文主要的研究目的、内容及意义 | 第29-32页 |
| ·研究目的 | 第29-30页 |
| ·研究内容 | 第30-31页 |
| ·研究意义 | 第31-32页 |
| 参考文献 | 第32-45页 |
| 第二章 缺失TSC1或TSC2的细胞在内质网压力下易产生细胞凋亡 | 第45-71页 |
| ·前言 | 第45页 |
| ·材料与方法 | 第45-50页 |
| ·试剂,抗体和细胞 | 第45-46页 |
| ·溶液配方 | 第46-47页 |
| ·器皿和仪器设备 | 第47-48页 |
| ·细胞培养 | 第48页 |
| ·在TSC2-/-LEF中重新表达TSC2 | 第48-49页 |
| ·在Hela细胞中沉默TSC1 | 第49页 |
| ·处理药物的储液配制 | 第49页 |
| ·蛋白质免疫杂交(Western Blotting) | 第49-50页 |
| ·准备流式细胞术样品 | 第50页 |
| ·结果 | 第50-63页 |
| ·在遭遇内质网压力时,TSC1-/-细胞比正常细胞更容易死亡 | 第50-53页 |
| ·内质网压力诱导的TSC1-/-细胞的死亡方式是凋亡 | 第53-55页 |
| ·在TSC2-/-细胞中重新表达TSC2 | 第55-56页 |
| ·在遭遇内质网压力时,TSC2-/-细胞比TSC2-rescued细胞更容易死亡 | 第56-57页 |
| ·内质网压力诱导的TSC2-/-细胞的死亡方式是凋亡 | 第57-60页 |
| ·应用慢病毒载体介导的RNA干扰,在Hela细胞中沉默TSC1 | 第60-62页 |
| ·在遭遇内质网压力时,TSC1沉默的细胞更容易凋亡 | 第62-63页 |
| ·讨论 | 第63-67页 |
| 参考文献 | 第67-71页 |
| 第三章 TSC1或TSC2缺失细胞的内质网应激反应不健全 | 第71-88页 |
| ·前言 | 第71-72页 |
| ·材料与方法 | 第72-76页 |
| ·试剂,抗体和细胞 | 第72页 |
| ·溶液配方 | 第72-74页 |
| ·器皿和仪器设备 | 第74页 |
| ·细胞培养 | 第74-75页 |
| ·处理药物的储液配制 | 第75页 |
| ·准备细胞裂解产物 | 第75页 |
| ·提取细胞核裂解物 | 第75页 |
| ·蛋白质免疫杂交(Western Blotting) | 第75-76页 |
| ·总RNA的提取和实时定量PCR | 第76页 |
| ·结果 | 第76-84页 |
| ·遭遇内质网压力时,eIF2α的磷酸化程度在TSC1-/-细胞中比在TSC1+/+细胞中更高 | 第76-78页 |
| ·遭遇内质网压力时,eIF2α的磷酸化程度在TSC2-/-细胞中比在TSC2-rescued细胞中更高 | 第78-79页 |
| ·在TSC1-/-细胞中,内质网压力引起的内质网应激反应不健全 | 第79-82页 |
| ·在TSC2-/-细胞中,内质网压力引起的内质网应激反应不健全 | 第82-83页 |
| ·内质网压力诱导的ATF6表达水平在TSCl沉默的细胞中更低 | 第83页 |
| ·在TSC1-/-细胞中,内质网压力仍然诱导LC3脂化的升高 | 第83-84页 |
| ·讨论 | 第84-87页 |
| 参考文献 | 第87-88页 |
| 第四章 内质网压力诱导的细胞凋亡与MTORCI的相关性 | 第88-111页 |
| ·前言 | 第88-89页 |
| ·材料与方法 | 第89-94页 |
| ·试剂,抗体和细胞 | 第89-90页 |
| ·溶液配方 | 第90-91页 |
| ·器皿和仪器设备 | 第91页 |
| ·细胞培养 | 第91-92页 |
| ·在Hela细胞中稳定过量表达Rheb | 第92页 |
| ·用慢病毒感染实现Rheb Q64L的高表达或内源Rheb的沉默 | 第92页 |
| ·在TSC1-/-细胞中沉默Raptor | 第92-93页 |
| ·处理药物的储液配制 | 第93页 |
| ·蛋白质免疫杂交(Western Blotting) | 第93页 |
| ·准备流式细胞术样品 | 第93-94页 |
| ·结果 | 第94-106页 |
| ·雷帕霉素不能阻碍内质网压力诱导TSC1-/-细胞产生凋亡 | 第94-96页 |
| ·雷帕霉素不能阻碍内质网压力诱导TSC2-/-细胞产生凋亡 | 第96-99页 |
| ·通过反转录病毒感染实现稳定地过量表达Rheb | 第99-100页 |
| ·在遭遇内质网压力时,过量表达Rheb的细胞更容易凋亡 | 第100-102页 |
| ·Rheb的沉默不能阻碍MG132诱导的细胞凋亡 | 第102-103页 |
| ·通过慢病毒感染,在TSC1-/-细胞中实现Raptor的沉默 | 第103-104页 |
| ·Raptor的沉默阻碍内质网压力在TSC1-/-细胞中诱导细胞凋亡 | 第104-105页 |
| ·ATF6的诱导表达在Raptor沉默的TSC1-/-细胞中得到了恢复 | 第105-106页 |
| ·讨论 | 第106-108页 |
| 参考文献 | 第108-111页 |
| 第五章 总结与展望 | 第111-115页 |
| ·结论总结 | 第111-112页 |
| ·创新点 | 第112页 |
| ·后续研究展望 | 第112-114页 |
| 参考文献 | 第114-115页 |
| 作者简历 | 第115页 |
