| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-12页 |
| 缩写词简表 | 第12-14页 |
| 第一章 Net1蛋白在肝细胞癌患者中的表达水平及其与预后的关系 | 第14-33页 |
| ·前言 | 第14-16页 |
| ·技术路线 | 第16-17页 |
| ·材料 | 第17-19页 |
| ·用于组织微阵列(tissue microarray,TMA)组织标本来源 | 第17页 |
| ·HCC患者的指标特征 | 第17-18页 |
| ·主要试剂和其他材料 | 第18页 |
| ·主要仪器 | 第18-19页 |
| ·方法 | 第19-24页 |
| ·组织微阵列的制作 | 第19页 |
| ·免疫组织化学方法(immunohistochemistry,IHC) | 第19-21页 |
| ·结果判断及标准 | 第21页 |
| ·随访及预后因素制定 | 第21-22页 |
| ·生存分析 | 第22-24页 |
| ·结果 | 第24-28页 |
| ·Net1在肝细胞癌中的表达及定位 | 第24-25页 |
| ·Net1蛋白表达与HCC临床病理学特征之间的关联 | 第25-26页 |
| ·HCC中Net1和预后的关系 | 第26-28页 |
| ·讨论 | 第28-32页 |
| ·高通量的肝癌组织芯片制备 | 第28-30页 |
| ·Net1蛋白肝细胞癌组织的分布模式及其意义 | 第30-32页 |
| ·结论 | 第32-33页 |
| 第二章 干扰Net1蛋白的表达对高转移肝癌细胞株MHCC-97H侵袭转移的影响 | 第33-61页 |
| ·前言 | 第33-35页 |
| ·技术路线 | 第35-36页 |
| ·材料 | 第36-39页 |
| ·细胞以及动物 | 第36页 |
| ·菌株和质粒载体 | 第36页 |
| ·主要试剂和其他材料 | 第36-37页 |
| ·主要仪器 | 第37-39页 |
| ·方法 | 第39-46页 |
| ·RNAi表达载体的构建 | 第39-40页 |
| ·大肠杆菌JM109感受态的制备 | 第40-41页 |
| ·PCR产物及酶切产物的回收 | 第41页 |
| ·转化反应 | 第41-42页 |
| ·将pRNAT-shRNA-Net1转染MHCC-97H细胞 | 第42页 |
| ·培养细胞的蛋白质制备 | 第42-43页 |
| ·BCA测蛋白浓度 | 第43页 |
| ·Western blot检测 | 第43-44页 |
| ·细胞生长曲线的绘制 | 第44页 |
| ·MTT实验 | 第44页 |
| ·划痕试验 | 第44-45页 |
| ·基质胶侵袭试验 | 第45页 |
| ·裸鼠转移模型实验 | 第45页 |
| ·统计学分析 | 第45-46页 |
| ·结果 | 第46-54页 |
| ·Net1-RNAi表达载体的构建 | 第46-47页 |
| ·检测Net1-RNAi对Net1蛋白表达的影响 | 第47页 |
| ·下调Net1蛋白表达水平后对MHCC-97H细胞增殖能力的影响 | 第47-49页 |
| ·下调Net1蛋白表达水平对MHCC-97H细胞的侵袭转移能力的影响 | 第49-54页 |
| ·讨论 | 第54-60页 |
| ·干扰Net1蛋白对MHCC-97H细胞体外水平侵袭行为的影响 | 第54-57页 |
| ·体内水平裸鼠实验性转移模型的建立 | 第57-58页 |
| ·干扰Net1蛋白对MHCC-97H细胞增殖行为的影响 | 第58-60页 |
| ·结论 | 第60-61页 |
| 第三章 Merlin介导了Net1在肝癌细胞内的泛素化降解 | 第61-86页 |
| ·前言 | 第61-63页 |
| ·技术路线 | 第63-64页 |
| ·材料 | 第64-67页 |
| ·细胞 | 第64页 |
| ·菌株和质粒载体 | 第64页 |
| ·主要试剂和其他材料 | 第64-65页 |
| ·主要仪器 | 第65-67页 |
| ·方法 | 第67-73页 |
| ·酵母双杂实验 | 第67-71页 |
| ·免疫共沉淀 | 第71-73页 |
| ·结果 | 第73-79页 |
| ·pGBKT7-Net1 bait载体的构建 | 第73页 |
| ·bait载体的自身激活检测 | 第73页 |
| ·文库质粒的扩增 | 第73-74页 |
| ·文库质粒转化及筛选转化子 | 第74-75页 |
| ·pGBKT7-Net1与pACT2-NF2特异性酵母双杂交 | 第75-76页 |
| ·免疫共沉淀实验验证Net1与Merlin蛋白在细胞内发生的交互作用 | 第76页 |
| ·Merlin促进了Net1蛋白在细胞内的泛素化降解 | 第76-79页 |
| ·讨论 | 第79-85页 |
| ·Net1与Merlin之间的交互作用 | 第79-82页 |
| ·Merlin介导了Net1的泛素化降解 | 第82-85页 |
| ·结论 | 第85-86页 |
| 参考文献 | 第86-98页 |
| 综述 | 第98-108页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第108-109页 |
| 致谢 | 第109页 |
