| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 缩略语表(Abbreviation) | 第11-12页 |
| 1 文献综述 | 第12-28页 |
| ·猪链球菌2型研究进展 | 第12-19页 |
| ·前言 | 第12页 |
| ·生物学特性 | 第12-13页 |
| ·毒力因子及发病机理 | 第13-16页 |
| ·人类感染猪链球菌的临床及流行病学特征 | 第16-19页 |
| ·Ⅲ型限制与修饰系统(R-M)研究进展 | 第19-28页 |
| ·Ⅲ型限制与修饰系统简介 | 第19-22页 |
| ·限制与修饰系统相变的发生 | 第22-24页 |
| ·Ⅲ型限制与修饰系统发生相变的作用 | 第24-26页 |
| ·噬菌体感染的屏障或者自然转化下的遗传变异 | 第24-25页 |
| ·通过自身DNA的降解并被相邻细胞吸收 | 第25页 |
| ·基因调控 | 第25-26页 |
| ·Ⅲ型限制与修饰系统相变调控作用的进一步发现 | 第26-27页 |
| ·展望 | 第27-28页 |
| 2 猪链球菌2型mod基因缺失株的构建及生物学特性研究 | 第28-51页 |
| ·研究目的与意义 | 第28-29页 |
| ·材料 | 第29-32页 |
| ·菌种和质粒 | 第29页 |
| ·主要药品及试剂 | 第29-30页 |
| ·主要培养基及抗生素的配制 | 第30页 |
| ·主要缓冲液的配制 | 第30-31页 |
| ·试验动物 | 第31页 |
| ·本研究中使用的引物 | 第31-32页 |
| ·方法 | 第32-51页 |
| ·猪链球菌2型基因组DNA的制备 | 第32页 |
| ·猪链球菌2型mod基因上下游同源臂及全长序列的克隆 | 第32-33页 |
| ·PCR或酶切产物的回收与纯化 | 第33页 |
| ·目的片段与载体的连接 | 第33-34页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备(氯化钙法) | 第34页 |
| ·载体的去磷酸化 | 第34页 |
| ·连接产物的转化 | 第34-35页 |
| ·质粒小量提取 | 第35页 |
| ·重组载体的鉴定 | 第35页 |
| ·抗性筛选基因—红霉素抗性基因的扩增 | 第35页 |
| ·自杀性重组质粒的构建 | 第35-36页 |
| ·自杀性重组质粒的快速PCR鉴定 | 第36页 |
| ·自杀性重组质粒的酶切鉴定 | 第36页 |
| ·互补质粒的构建 | 第36页 |
| ·互补质粒的快速PCR鉴定 | 第36页 |
| ·互补质粒的酶切鉴定 | 第36页 |
| ·自杀性重组质粒和互补质粒的大量提取 | 第36-37页 |
| ·猪链球菌2型RNA的提取 | 第37-38页 |
| ·猪链球菌2型mod基因缺失突变株和互补菌株的构建及鉴定 | 第38-41页 |
| ·猪链球菌2型mod基因缺失株的Southern杂交鉴定 | 第41-44页 |
| ·mod基因缺失菌株和互补菌株的生物学特性研究 | 第44-46页 |
| ·mod基因对细菌毒力的影响 | 第46-47页 |
| ·Agilent基因表达谱芯片(双标)制备与分析 | 第47-51页 |
| 3 结果与分析 | 第51-70页 |
| ·猪链球菌2型mod基因缺失菌株和互补菌株的筛选与鉴定 | 第51-54页 |
| ·猪链球菌2型mod基因缺失菌株的构建及PCR鉴定 | 第51页 |
| ·猪链球菌2型mod基因缺失菌株的PCR鉴定 | 第51-52页 |
| ·mod基因缺失菌株的Southern blot鉴定 | 第52-53页 |
| ·mod基因互补菌株的构建及PCR鉴定 | 第53页 |
| ·mod基因互补菌株的功能鉴定 | 第53-54页 |
| ·猪链球菌2型mod基因缺失菌株和互补菌株的生长特性试验 | 第54-55页 |
| ·野生株,突变株和互补菌株的形态结构比较 | 第55-57页 |
| ·革兰氏染色比较 | 第55页 |
| ·扫描电子显微镜的观察(SEM) | 第55-56页 |
| ·透射电子显微镜的观察(TEM) | 第56-57页 |
| ·mod基因的缺失对细菌毒力的影响 | 第57-59页 |
| ·仔猪的感染试验 | 第57-58页 |
| ·竞争感染试验 | 第58-59页 |
| ·野生株SC-19和突变株△mod的表达谱差异分析 | 第59-70页 |
| ·RNA提取的质量检测 | 第59-60页 |
| ·野生株WT和突变株△mod的基因表达差异 | 第60-70页 |
| 4 讨论 | 第70-72页 |
| ·温敏型自杀性质粒pSET4s在突变株构建中的问题 | 第70页 |
| ·mod基因与猪链球菌2型致病性的关系 | 第70-71页 |
| ·进一步的工作设想 | 第71-72页 |
| 5 总结 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-82页 |
| 致谢 | 第82页 |
