| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-16页 |
| 引言 | 第16-18页 |
| 1 文献综述 | 第18-51页 |
| ·蛇毒类凝血酶性质、功能及研究进展 | 第18-32页 |
| ·丝氨酸蛋白酶概述 | 第18-19页 |
| ·蛇毒类凝血酶概述 | 第19-25页 |
| ·蛇毒类凝血酶的生理生化性质 | 第25-28页 |
| ·蛇毒类凝血酶重组表达的研究进展 | 第28-29页 |
| ·蛇毒类凝血酶的分离纯化技术 | 第29-32页 |
| ·叶绿素结合蛋白Pcb的性质、功能及研究进展 | 第32-48页 |
| ·光合系统概述 | 第32-38页 |
| ·叶绿素结合蛋白Pcb概述 | 第38-42页 |
| ·叶绿素结合蛋白Pcb的进化 | 第42-45页 |
| ·叶绿素结合蛋白的体外重组表达及其与叶绿素结合性质的研究进展 | 第45-46页 |
| ·细胞器的分离 | 第46-48页 |
| ·本论文选题依据和研究内容 | 第48-51页 |
| ·选题依据 | 第48-50页 |
| ·研究内容 | 第50-51页 |
| 2 重组大连蛇岛蝮蛇类凝血酶在毕赤酵母中克隆与表达 | 第51-70页 |
| ·引言 | 第51-52页 |
| ·实验材料与仪器 | 第52页 |
| ·基因、质粒和菌株 | 第52页 |
| ·工具酶 | 第52页 |
| ·试剂 | 第52页 |
| ·实验仪器 | 第52页 |
| ·溶液配制 | 第52页 |
| ·实验方法 | 第52-57页 |
| ·聚合酶链式反应(PCR) | 第52-53页 |
| ·大连蛇岛蝮蛇毒类凝血酶基因在表达载体pPICgK中的克隆 | 第53-54页 |
| ·表达载体转化毕赤酵母细胞GS115 | 第54-55页 |
| ·重组菌株的诱导表达 | 第55页 |
| ·酰胺水解活性检测 | 第55页 |
| ·变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测(SDS-PAGE) | 第55-56页 |
| ·蛋白质免疫印迹检测(Western blot) | 第56页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第56-57页 |
| ·结果与分析 | 第57-68页 |
| ·大连蛇岛蝮蛇类凝血酶基因的亚克隆 | 第57-59页 |
| ·大连蛇岛蝮蛇类凝血酶基因在毕赤酵母中的克隆 | 第59-61页 |
| ·大连蛇岛蝮蛇类凝血酶基因在毕赤酵母中的表达 | 第61-62页 |
| ·表达条件的优化 | 第62-68页 |
| ·讨论 | 第68-69页 |
| ·小结 | 第69-70页 |
| 3 重组大连蛇岛蝮蛇毒类凝血酶基因的分离纯化及活性 | 第70-81页 |
| ·引言 | 第70页 |
| ·实验材料 | 第70页 |
| ·实验材料 | 第70页 |
| ·实验方法 | 第70-73页 |
| ·重组蛋白的表达 | 第70-71页 |
| ·蛋白样品的制备 | 第71页 |
| ·蛋白定量的方法 | 第71页 |
| ·Q HP阴离子交换层析 | 第71页 |
| ·Superdex 200凝胶过滤层析 | 第71页 |
| ·酰胺水解活性 | 第71页 |
| ·纤维蛋白酶原凝结活性 | 第71-72页 |
| ·纤维蛋白原裂解活性 | 第72页 |
| ·变性聚丙烯凝胶电泳检测(SDS-PAGE) | 第72页 |
| ·蛋白质免疫印迹检测(Western blot) | 第72页 |
| ·抑制剂对酰胺水解活力的影响 | 第72-73页 |
| ·最适温度和最适pH值的测定 | 第73页 |
| ·结果与分析 | 第73-78页 |
| ·重组蛇毒类凝血酶的分离纯化 | 第73-76页 |
| ·重组蛇毒类凝血酶活性 | 第76-78页 |
| ·讨论 | 第78-80页 |
| ·小结 | 第80-81页 |
| 4 重组叶绿素d结合蛋白PcbA在synechocystis sp.PCC6803中的克隆与表达 | 第81-96页 |
| ·引言 | 第81页 |
| ·实验材料与仪器 | 第81-83页 |
| ·基因、质粒和菌株 | 第81-82页 |
| ·工具酶和化学试剂 | 第82页 |
| ·引物 | 第82页 |
| ·实验仪器 | 第82页 |
| ·溶液配制 | 第82-83页 |
| ·实验方法 | 第83-86页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第83页 |
| ·质粒的提取 | 第83页 |
| ·样品DNA片段的切胶回收 | 第83页 |
| ·样品DNA片段的精制 | 第83页 |
| ·叶绿素结合蛋白PcbA基因的表达载体构建 | 第83-84页 |
| ·叶绿素结合蛋白PcbA基因在蓝藻中的转化 | 第84页 |
| ·提取基因组DNA | 第84页 |
| ·RT-PCR | 第84-85页 |
| ·重组菌株的培养 | 第85页 |
| ·类囊体膜的提取 | 第85页 |
| ·变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测(SDS-PAGE) | 第85页 |
| ·蛋白质免疫印迹检测(Western blot) | 第85-86页 |
| ·蛋白浓度定量 | 第86页 |
| ·叶绿素含量的测定 | 第86页 |
| ·金属螯合层析 | 第86页 |
| ·实验结果与分析 | 第86-93页 |
| ·重组PcbA基因的表达载体构建 | 第86-89页 |
| ·重组PcbA基因的表达载体的转化 | 第89-91页 |
| ·RNA水平检测目的基因的转录 | 第91-92页 |
| ·重组PcbA的表达 | 第92-93页 |
| ·重组PcbA的分离纯化 | 第93页 |
| ·讨论 | 第93-95页 |
| ·小结 | 第95-96页 |
| 5 重组叶绿素d结合蛋白PcbA在宿主中的生理活性 | 第96-110页 |
| ·引言 | 第96页 |
| ·实验材料与设备 | 第96-97页 |
| ·实验材料 | 第96页 |
| ·实验设备 | 第96-97页 |
| ·实验方法 | 第97-98页 |
| ·类囊体膜增溶 | 第97页 |
| ·蓝绿温和胶电泳 | 第97页 |
| ·蛋白质免疫印迹检测 | 第97-98页 |
| ·吸收波谱分析 | 第98页 |
| ·荧光光谱分析 | 第98页 |
| ·结果与分析 | 第98-106页 |
| ·重组PcbA在宿主中的定位 | 第98-99页 |
| ·重组PcbA与类囊体膜光合系统的结合 | 第99-101页 |
| ·重组PcbA与叶绿素的结合 | 第101-102页 |
| ·波谱分析重组pcbA的生理活性 | 第102-106页 |
| ·讨论 | 第106-109页 |
| ·重组叶绿素结合蛋白PcbA在宿主中的定位及结合性质 | 第106-107页 |
| ·吸收波谱分析重组PcbA在宿主中的生理活性 | 第107-108页 |
| ·荧光波谱分析重组PcbA在宿主中的生理活性 | 第108-109页 |
| ·小结 | 第109-110页 |
| 结论与展望 | 第110-112页 |
| 创新点摘要 | 第112-113页 |
| 参考文献 | 第113-124页 |
| 附录A 质粒图谱 | 第124-125页 |
| 附录B 常用仪器设备 | 第125-126页 |
| 附录C 常用溶液配制 | 第126-128页 |
| 附录D 质粒DNA的提取 | 第128-130页 |
| 附录E DNA片段的切胶回收 | 第130-132页 |
| 附录F DNA片断的精制 | 第132-133页 |
| 攻读博士期间发表论文情况 | 第133-134页 |
| 致谢 | 第134-135页 |
| 作者简介 | 第135-137页 |
