| 个人简历 | 第3-8页 |
| 中文摘要 | 第8-12页 |
| ABSTRACT | 第12-16页 |
| 前言 | 第17-20页 |
| 第一部分 绞股蓝转录组测序挖掘三萜合成通路及相关酶基因 | 第20-51页 |
| 一、绞股蓝转录组测序分析 | 第20-32页 |
| 1、实验材料、试剂与仪器 | 第20-21页 |
| 2、实验步骤 | 第21-24页 |
| (1)绞股蓝RNA提取 | 第21-22页 |
| (2)绞股蓝转录组测序及三萜合成相关酶基因和通路挖掘 | 第22-24页 |
| 3、实验结果 | 第24-29页 |
| (1)绞股蓝根、茎和叶的RNA提取情况 | 第24-25页 |
| (2)绞股蓝转录组测序数据评价 | 第25-26页 |
| (3)绞股蓝三萜合成通路关键酶基因信息 | 第26-29页 |
| 4、讨论 | 第29-32页 |
| 二、绞股蓝三萜合成相关基因FPS、SS和 SE定量表达 | 第32-45页 |
| 1、实验材料、试剂与仪器 | 第32页 |
| 2、实验步骤 | 第32-38页 |
| (1)引物设计及合成 | 第32-33页 |
| (2)绞股蓝根、茎、叶cDNA合成 | 第33-34页 |
| (3)FPS、SS、SE基因荧光定量PCR标准模板制备 | 第34-38页 |
| 3、实验结果 | 第38-41页 |
| (1)引物设计与cDNA合成情况 | 第38-39页 |
| (2)荧光定量qPCR数据处理 | 第39-41页 |
| 4、讨论 | 第41-45页 |
| 三、绞股蓝根茎叶三萜皂苷含量测定 | 第45-51页 |
| 1、实验材料、试剂与仪器 | 第45页 |
| 2、实验步骤 | 第45-47页 |
| (1)对照品溶液与供试品溶液 | 第45-46页 |
| (2)确定分析方法与参数 | 第46-47页 |
| (3)绞股蓝根、茎和叶三萜皂苷含量测定 | 第47页 |
| 3、实验结果 | 第47-49页 |
| (1)对照品标准曲线 | 第47页 |
| (2)供试品三萜皂苷含量测定结果 | 第47-49页 |
| 4、讨论 | 第49-51页 |
| 第二部分 绞股蓝鲨烯合酶正选择位点突变表达载体构建 | 第51-81页 |
| 一、绞股蓝鲨烯合酶SS表达载体构建 | 第51-71页 |
| 1、实验材料、试剂与仪器 | 第51-53页 |
| 2、实验步骤 | 第53-60页 |
| (1)绞股蓝新鲜嫩叶总RNA提取 | 第53页 |
| (2)绞股蓝叶子cDNA合成及纯化 | 第53页 |
| (3)绞股蓝SS基因片段克隆 | 第53-55页 |
| (4)绞股蓝SS酶基因序列与结构分析 | 第55页 |
| (5)绞股蓝表达载体设计 | 第55-56页 |
| (6)载体pEASY-E1-SS和 pcDNA3.1(+)-SS构建 | 第56-60页 |
| 3、结果 | 第60-67页 |
| (1)绞股蓝SS基因克隆结果 | 第60-62页 |
| (2)绞股蓝SS氨基酸序列分析和结构分析结果 | 第62-64页 |
| (3)绞股蓝SS表达载体构建结果 | 第64-67页 |
| 4、讨论 | 第67-71页 |
| 二、绞股蓝SS表达载体正选择位点突变 | 第71-81页 |
| 1、实验材料、试剂与仪器 | 第71页 |
| 2、实验步骤 | 第71-75页 |
| (1)突变位点选择与突变引物设计 | 第71-72页 |
| (2)重组表达载体正选择位点定点突变实验 | 第72-73页 |
| (3)pEASY-E1-SS和 pcDNA3.1(+)-SS突变质粒提取 | 第73-75页 |
| 3、实验结果 | 第75-78页 |
| (1)绞股蓝SS序列正选择点突变引物设计结果 | 第75页 |
| (2)重组表达载体突变结果 | 第75-76页 |
| (3)突变质粒提取结果 | 第76-78页 |
| 4、讨论 | 第78-81页 |
| 全文总结 | 第81-83页 |
| 正文参考文献 | 第83-90页 |
| 综述 绞股蓝皂苷药理作用及绞股蓝皂苷结构多样性研究进展 | 第90-109页 |
| 综述参考文献 | 第101-109页 |
| 附录图 | 第109-115页 |
| 附录表 | 第115-119页 |
| 致谢 | 第119-120页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第120页 |
