| 缩略词中英文对照表 | 第12-14页 |
| 摘要 | 第14-16页 |
| ABSTRACT | 第16-18页 |
| 第1章 绪论 | 第19-34页 |
| 1.1 组织蛋白酶的主要特征 | 第19-21页 |
| 1.2 组织蛋白酶的功能概述 | 第21-24页 |
| 1.3 组织蛋白酶与细胞凋亡 | 第24-29页 |
| 1.4 组织蛋白酶在甲壳动物中的研究进展 | 第29-32页 |
| 1.5 本研究的目的意义和技术路线 | 第32-34页 |
| 1.5.1 研究目的和意义 | 第32-33页 |
| 1.5.2 技术路线 | 第33-34页 |
| 第2章 拟穴青蟹组织蛋白酶基因克隆及体内表达特性分析 | 第34-58页 |
| 2.1 实验材料 | 第34-35页 |
| 2.1.1 实验动物和菌株 | 第34页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第34-35页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第35页 |
| 2.2 实验方法 | 第35-40页 |
| 2.2.1 拟穴青蟹的细菌感染和LPS刺激 | 第35页 |
| 2.2.2 拟穴青蟹组织的采集 | 第35-36页 |
| 2.2.3 总RNA提取和cDNA合成 | 第36页 |
| 2.2.4 基因克隆 | 第36-38页 |
| 2.2.5 生物信息学分析 | 第38-39页 |
| 2.2.6 实时荧光定量PCR | 第39-40页 |
| 2.3 实验结果 | 第40-54页 |
| 2.3.1 SpCathB、SpCathL、SpCathD基因ORF序列扩增和分析 | 第40-46页 |
| 2.3.2 SpCathB、SpCathL、SpCathD序列同源性分析 | 第46-50页 |
| 2.3.3 SpCathB、SpCathL、SpCathD基因扩增效率和扩增产物特异性分析 | 第50-51页 |
| 2.3.4 SpCathB、SpCathL、SpCathD在拟穴青蟹各组织中的表达分布 | 第51-53页 |
| 2.3.5 SpCathB、SpCathL、SpCathD在副溶血弧菌感染后的诱导表达特性 | 第53页 |
| 2.3.6 SpCathB、SpCathL、SpCathD在LPS刺激后的诱导表达特性 | 第53-54页 |
| 2.4 讨论 | 第54-58页 |
| 2.4.1 SpCathB、SpCathL、SpCathD序列分析 | 第54-55页 |
| 2.4.2 SpCathB、SpCathL、SpCathD在拟穴青蟹体内的分布特性 | 第55-56页 |
| 2.4.3 SpCathB、SpCathL、SpCathD在拟穴青蟹机体免疫中的作用 | 第56-58页 |
| 第3章 拟穴青蟹组织蛋白酶L酶原的真核表达及酶学性质研究 | 第58-74页 |
| 3.1 实验材料 | 第58-59页 |
| 3.1.1 表达载体和菌株 | 第58页 |
| 3.1.2 主要试剂和耗材 | 第58页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第58-59页 |
| 3.2 实验方法 | 第59-64页 |
| 3.2.1 重组表达质粒的构建 | 第59-60页 |
| 3.2.2 毕赤酵母蛋白表达 | 第60-61页 |
| 3.2.3 SDS-PAGE | 第61-62页 |
| 3.2.4 蛋白质谱鉴定 | 第62页 |
| 3.2.5 SpCathL酶原自催化实验 | 第62-63页 |
| 3.2.6 SpCathL的相对酶活性检测 | 第63-64页 |
| 3.2.7 SpCathL最适pH和最适温度检测 | 第64页 |
| 3.3 实验结果 | 第64-71页 |
| 3.3.1 proSpCathL的真核表达及纯化 | 第64-65页 |
| 3.3.2 proSpCathL的蛋白质谱鉴定 | 第65-66页 |
| 3.3.3 proSpCathL自催化特性研究 | 第66-69页 |
| 3.3.4 SpCathL的相对酶活性检测 | 第69页 |
| 3.3.5 SpCathL的最适pH和最适温度检测 | 第69-71页 |
| 3.4 讨论 | 第71-74页 |
| 3.4.1 proSpCathL的真核表达 | 第71页 |
| 3.4.2 proSpCathL的自催化特性 | 第71-72页 |
| 3.4.3 proSpCathL的酶活性及最适条件 | 第72-74页 |
| 第4章 拟穴青蟹组织蛋白酶在细胞凋亡中的功能探究 | 第74-89页 |
| 4.1 实验材料 | 第74-75页 |
| 4.1.1 表达载体和细胞 | 第74页 |
| 4.1.2 主要试剂和耗材 | 第74页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第74-75页 |
| 4.2 实验方法 | 第75-80页 |
| 4.2.1 重组表达质粒的构建 | 第75-77页 |
| 4.2.2 昆虫细胞S2和HighFive的培养 | 第77页 |
| 4.2.3 SpCathB、SpCathL、SpCathD转染与溶酶体染色实验 | 第77-78页 |
| 4.2.4 SpCathB、SpCathL、SpCathD转染与细胞凋亡实验 | 第78-79页 |
| 4.2.5 Sp-caspase的相对酶活性测定 | 第79-80页 |
| 4.3 实验结果 | 第80-86页 |
| 4.3.1 SpCathB、SpCathL、SpCathD与溶酶体的共定位检测 | 第80-81页 |
| 4.3.2 SpCathB、SpCathL、SpCathD单独转染后的细胞凋亡 | 第81-84页 |
| 4.3.3 Sp-caspase与SpCathB、SpCathL、SpCathD共转染后的细胞凋亡 | 第84-85页 |
| 4.3.4 SpCathL对Sp-caspase的作用 | 第85-86页 |
| 4.4 讨论 | 第86-89页 |
| 结语 | 第89-91页 |
| 参考文献 | 第91-102页 |
| 在学期间参加的科研项目及成果 | 第102-103页 |
| 致谢 | 第103页 |
