| 致谢 | 第4-8页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| 1 文献综述 | 第10-17页 |
| 1.1 eIF2α激酶调控蛋白翻译起始的分子机制 | 第10-13页 |
| 1.1.1 蛋白质翻译的起始 | 第10页 |
| 1.1.2 eIF2α激酶对蛋白翻译的调控 | 第10-11页 |
| 1.1.2.1 eIF2的结构与功能 | 第10-11页 |
| 1.1.2.2 eIF2B(eukaryotic initiation factor2B)的结构与功能 | 第11页 |
| 1.1.3 eIF2α激酶的结构、功能及其调控机制 | 第11-13页 |
| 1.1.3.1 GCN2的功能及其调控机制 | 第11-12页 |
| 1.1.3.2 HRI介导的蛋白翻译调控机制 | 第12页 |
| 1.1.3.3 PKR介导的蛋白翻译调控机制 | 第12页 |
| 1.1.3.4 PERK介导的蛋白翻译调控机制 | 第12-13页 |
| 1.2 GCN2介导的胁迫应答机制 | 第13-15页 |
| 1.2.1 GCN2在动物和酵母细胞中的研究进展 | 第13-14页 |
| 1.2.1.1 GCN2对非生物胁迫的应答 | 第13页 |
| 1.2.1.2 GCN2对生物胁迫的应答 | 第13页 |
| 1.2.1.3 GCN2和TOR途径的关系 | 第13-14页 |
| 1.2.2 GCN2在植物中的研究进展 | 第14-15页 |
| 1.2.2.1 植物中eIF2α激酶 | 第14页 |
| 1.2.2.2 植物中GCN2参与的胁迫应答 | 第14-15页 |
| 1.3 植物中GCN2参与“引发”的可能性 | 第15-17页 |
| 1.3.1 “引发”的概念 | 第15-16页 |
| 1.3.2 SA和AZA参与“引发”的可能性 | 第16页 |
| 1.3.3 GCN2响应胁迫并参与“引发”的可能性 | 第16-17页 |
| 2 引言 | 第17-18页 |
| 2.1 研究的目的和意义 | 第17页 |
| 2.2 研究内容 | 第17页 |
| 2.3 研究的创新点 | 第17-18页 |
| 3 材料与方法 | 第18-33页 |
| 3.1 实验材料 | 第18-19页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第18页 |
| 3.1.2 培养基和溶液配制 | 第18-19页 |
| 3.1.3 主要试剂药品和仪器 | 第19页 |
| 3.2 实验方法 | 第19-33页 |
| 3.2.1 全长cDNA的克隆 | 第19-27页 |
| 3.2.1.1 Total RNA提取 | 第19-20页 |
| 3.2.1.2 反转录RT-PCR反应 | 第20页 |
| 3.2.1.3 5'RACE和3'RACE模板制备 | 第20-21页 |
| 3.2.1.4 PCR反应 | 第21-23页 |
| 3.2.1.5 琼脂糖凝胶电泳检测核酸质量 | 第23-24页 |
| 3.2.1.6 DNA片段纯化 | 第24页 |
| 3.2.1.7 DH5α感受态细胞的制备 | 第24页 |
| 3.2.1.8 连接反应 | 第24-25页 |
| 3.2.1.9 转化DH5α细胞 | 第25页 |
| 3.2.1.10 菌落PCR验证 | 第25页 |
| 3.2.1.11 质粒的提取 | 第25-26页 |
| 3.2.1.12 重组克隆的酶切鉴定 | 第26页 |
| 3.2.1.13 DNA测序 | 第26页 |
| 3.2.1.14 序列分析 | 第26-27页 |
| 3.2.2 重组蛋白质的诱导表达 | 第27-31页 |
| 3.2.2.1 重组质粒的构建 | 第27页 |
| 3.2.2.2 原核表达载体的构建和蛋白表达 | 第27页 |
| 3.2.2.3 重组蛋白的提取 | 第27-28页 |
| 3.2.2.4 Ni~(2+)-NTA琼脂糖柱纯化蛋白 | 第28页 |
| 3.2.2.5 SDS-PAGE电泳 | 第28-30页 |
| 3.2.2.6 Western-blotting操作方法 | 第30-31页 |
| 3.2.3 Quantitative-PCR检测基因的表达 | 第31-32页 |
| 3.2.4 TMV接种方法 | 第32页 |
| 3.2.5 烟叶样品采取方法 | 第32页 |
| 3.2.6 数据分析与处理 | 第32-33页 |
| 4 结果与分析 | 第33-45页 |
| 4.1 NtGCN2全长cDNA的克隆 | 第33-37页 |
| 4.1.1 NtGCN2 cDNA序列的克隆和测序 | 第33页 |
| 4.1.2 NtGCN2 cDNA末端的5'/3'RACE | 第33-34页 |
| 4.1.3 NtGCN2 cDNA全长的获得 | 第34页 |
| 4.1.4 NtGCN2基因全长cDNA的序列分析 | 第34-35页 |
| 4.1.5 NtGCN2的系统进化分析 | 第35-36页 |
| 4.1.6 NtGCN2基因表达分析 | 第36-37页 |
| 4.2 烟草NtGCN2和NteIF2α的原核表达和蛋白纯化 | 第37-42页 |
| 4.2.1 原核表达载体pET15b-NtGCN2的构建及蛋白表达 | 第37-40页 |
| 4.2.1.1 原核表达载体pET15b-NtGCN2的构建 | 第37-38页 |
| 4.2.1.2 NtGCN2的原核表达 | 第38-39页 |
| 4.2.1.3 NtGCN2重组蛋白的初步纯化 | 第39-40页 |
| 4.2.2 原核表达载体pET15b-NteIF2α的构建及表达 | 第40-42页 |
| 4.2.2.1 原核表达载体pET15b-NteIF2α的构建 | 第40页 |
| 4.2.2.2 pET15b-NteIF2α的原核表达 | 第40-41页 |
| 4.2.2.3 pET15b-NteIF2α重组蛋白的初步纯化 | 第41-42页 |
| 4.3 NtGCN2对胁迫响应的研究 | 第42-45页 |
| 4.3.1 团棵期烟草中NtGCN2对SA(水杨酸)的响应 | 第42-43页 |
| 4.3.2 苗期烟草中NtGCN2对AZA(壬二酸)的响应 | 第43页 |
| 4.3.3 团棵期烟草中NtGCN2对AZA(壬二酸)的响应 | 第43-44页 |
| 4.3.4 团棵期烟草中NtGCN2对TMV(烟草普通花叶病毒)的响应 | 第44-45页 |
| 5 结论和讨论 | 第45-47页 |
| 参考文献 | 第47-53页 |
| 英文摘要 | 第53-54页 |
