| 中文摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 缩略语表 | 第7-11页 |
| 第一章 引言 | 第11-20页 |
| 1.1 天然产物的发展历程 | 第11-13页 |
| 1.1.1 放线菌来源的天然产物 | 第11-13页 |
| 1.1.2 天然产物的发现策略 | 第13页 |
| 1.2 聚酮和聚肽类天然产物 | 第13-16页 |
| 1.2.1 聚酮类天然产物 | 第13-14页 |
| 1.2.2 聚肽类天然产物 | 第14-16页 |
| 1.2.3 聚酮/聚肽杂合类天然产物 | 第16页 |
| 1.3 脂肽类天然产物 | 第16-19页 |
| 1.3.1 脂肽类天然产物的分类和生物学功能 | 第16-17页 |
| 1.3.2 环脂肽类天然产物的生物合成机制 | 第17-19页 |
| 1.4 本课题研究的目的和意义 | 第19-20页 |
| 第二章 材料与方法 | 第20-37页 |
| 2.1 菌种与质粒 | 第20页 |
| 2.2 实验用引物 | 第20-21页 |
| 2.3 实验用仪器和部分试剂 | 第21-23页 |
| 2.3.1 实验用仪器 | 第21-22页 |
| 2.3.2 实验用生物试剂和主要化学试剂 | 第22-23页 |
| 2.4 培养基 | 第23-24页 |
| 2.5 溶液 | 第24-26页 |
| 2.5.1 DNA琼脂糖凝胶电泳用溶液 | 第24-25页 |
| 2.5.2 实验用抗生素溶液 | 第25页 |
| 2.5.3 其它溶液 | 第25-26页 |
| 2.6 菌种活化 | 第26页 |
| 2.7 链霉菌总基因组提取 | 第26-27页 |
| 2.8 PCR反应体系 | 第27-28页 |
| 2.9 DNA琼脂糖凝胶电泳 | 第28页 |
| 2.10 碱式裂解法提取大肠杆菌质粒 | 第28-29页 |
| 2.11 大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第29-30页 |
| 2.11.1 Inoue法感受态细胞的制备 | 第29页 |
| 2.11.2 电转化法感受态细胞的制备 | 第29-30页 |
| 2.11.3 大肠杆菌化学转化法 | 第30页 |
| 2.11.4 大肠杆菌电转化法 | 第30页 |
| 2.12 TA克隆蓝白斑筛选 | 第30-31页 |
| 2.13 片段和载体的双酶切以及连接重组 | 第31-32页 |
| 2.14 基因中断原理和基因中断重组质粒构建 | 第32-33页 |
| 2.14.1 基因中断原理 | 第32页 |
| 2.14.2 基因中断重组质粒的构建 | 第32-33页 |
| 2.15 链霉菌和大肠杆菌的属间接合转移 | 第33-34页 |
| 2.16 S.thermolilacinus SPC6野生型菌株和中断突变菌株发酵产物处理 | 第34页 |
| 2.16.1 液体发酵产物处理 | 第34页 |
| 2.16.2 固体发酵产物处理 | 第34页 |
| 2.17 发酵产物HPLC检测 | 第34-35页 |
| 2.18 发酵产物LC-MS检测 | 第35-37页 |
| 第三章 实验结果 | 第37-52页 |
| 3.1 S.thermolilacinus SPC6相关培养基的筛选 | 第37-39页 |
| 3.1.1 产孢培养基的筛选 | 第37-38页 |
| 3.1.2 发酵培养基的筛选 | 第38-39页 |
| 3.1.3 其他培养基的筛选 | 第39页 |
| 3.2 WT-SPC6发酵粗提物抑菌活性测试 | 第39-40页 |
| 3.3 S.thermolilacinus SPC6中环脂肽化合物Marihysin A的发现 | 第40-43页 |
| 3.3.1 WT-SPC6发酵产物Marihysin AHPLC检测结果 | 第42页 |
| 3.3.2 WT-SPC6发酵产物Marihysin ALC-MS检测结果 | 第42-43页 |
| 3.3.3 WT-SPC6发酵产物Marihysin A抑菌活性测试 | 第43页 |
| 3.4 S.thermolilacinus SPC6生物合成基因簇的生物信息学分析 | 第43-46页 |
| 3.5 基因中断重组质粒构建 | 第46-50页 |
| 3.5.1 S.thermolilacinus SPC6总基因组提取 | 第46页 |
| 3.5.2 中断基因簇中部分基因片段的扩增 | 第46-47页 |
| 3.5.3 克隆用载体的选择 | 第47-49页 |
| 3.5.4 C9、C14和C28基因中断重组质粒的构建 | 第49页 |
| 3.5.5 基因中断重组质粒酶切验证 | 第49-50页 |
| 3.6 中断突变株基因型鉴定 | 第50页 |
| 3.7 中断突变株发酵粗提物活性测试 | 第50-51页 |
| 3.8 S.thermolilacinus SPC6野生型菌株和中断突变型菌株发酵产物HPLC检测结果 | 第51-52页 |
| 第四章 讨论与展望 | 第52-54页 |
| 参考文献 | 第54-58页 |
| 致谢 | 第58页 |
