| 摘要 | 第4-7页 |
| ABSTRACT | 第7-10页 |
| 英文缩略词 | 第11-16页 |
| 前言 | 第16-22页 |
| 1 仪器、试剂、材料和试验方法 | 第22-34页 |
| 1.1 主要材料和试剂 | 第22-23页 |
| 1.2 仪器 | 第23-24页 |
| 1.3 主要试剂配制 | 第24-34页 |
| 1.3.1 1MTris-HCL溶液的配制 | 第24页 |
| 1.3.2 1xPBS液的配方 | 第24页 |
| 1.3.3 0.5 MEDTA溶液的配制 | 第24页 |
| 1.3.4 TE溶液的配制 | 第24-25页 |
| 1.3.5 2.5 MHCl的配制 | 第25页 |
| 1.3.6 LB平板的配制 | 第25页 |
| 1.3.7 LB溶液的配制 | 第25页 |
| 1.3.8 50%甘油溶液的配制 | 第25-26页 |
| 1.3.9 5×TBE溶液的配制 | 第26页 |
| 1.3.10 0.5 ×TBE溶液的配制 | 第26页 |
| 1.3.11 D-Hanks液的配方 | 第26页 |
| 1.3.12 DMEM培养基 | 第26-27页 |
| 1.3.13 1 MTris-HCl(pH=6.8)100mL | 第27页 |
| 1.3.14 1.5 MTris-HCl(pH=8.8)500mL | 第27页 |
| 1.3.15 4xLoadingSampleBuffer10mL | 第27页 |
| 1.3.16 10%SDS100mL | 第27-28页 |
| 1.3.17 10%过硫酸铵(APS)1mL | 第28页 |
| 1.3.18 10X电泳缓冲液1L | 第28页 |
| 1.3.19 10x转膜缓冲液1L | 第28页 |
| 1.3.20 10xTBS液 | 第28-29页 |
| 1.3.21 1xTBST1000mL | 第29页 |
| 1.3.22 5%milk100mL | 第29页 |
| 1.3.23 5%BSA10mL | 第29页 |
| 1.3.24 0.5 moL/LEDTA乙二胺四乙酸溶液100mL | 第29-30页 |
| 1.3.25 细胞裂解液 | 第30页 |
| 1.3.26 20%BSA | 第30页 |
| 1.3.27 RNA提取专用75%乙醇溶液200mL | 第30页 |
| 1.3.28 PBS磷酸盐缓冲溶液(2L) | 第30-31页 |
| 1.3.29 4%中性多聚甲醛溶液(1L) | 第31页 |
| 1.3.30 10%分离胶；5%浓缩胶 | 第31-32页 |
| 1.3.31 5%BSA10mL | 第32页 |
| 1.3.32 0.2mol/LEGTA溶液100mL | 第32页 |
| 1.3.33 westernblot组织裂解液(100mL) | 第32-33页 |
| 1.3.34 台盼蓝(TrypanBlue)染液的配制 | 第33-34页 |
| 2 实验方法与步骤 | 第34-46页 |
| 2.1 神经元的提取及培养 | 第34页 |
| 2.2 MTT实验 | 第34-35页 |
| 2.3 神经元RNA的提取 | 第35页 |
| 2.4 RNA的MIRNA反转录 | 第35-37页 |
| 2.4.1 RNA加A尾 | 第35-36页 |
| 2.4.2 Poly(A)修饰的miRNA逆转录 | 第36页 |
| 2.4.3 引物稀释 | 第36页 |
| 2.4.4 cDNA反转录 | 第36-37页 |
| 2.5 RT-PCR检测目的基因MRNA表达水平 | 第37-38页 |
| 2.6 实时荧光定量PCR | 第38页 |
| 2.7 细胞蛋白样品制备 | 第38-40页 |
| 2.7.1 蛋白提取 | 第38-39页 |
| 2.7.2 用Bradford法测蛋白浓度 | 第39页 |
| 2.7.3 蛋白变性 | 第39-40页 |
| 2.8 蛋白免疫印迹实验 | 第40-41页 |
| 2.8.1 配胶 | 第40页 |
| 2.8.2 电泳 | 第40页 |
| 2.8.3 转膜 | 第40-41页 |
| 2.8.4 封闭 | 第41页 |
| 2.8.5 孵育一抗 | 第41页 |
| 2.8.6 孵育二抗 | 第41页 |
| 2.8.7 显色 | 第41页 |
| 2.9 细胞爬片的制备 | 第41页 |
| 2.10 细胞免疫荧光实验 | 第41-42页 |
| 2.11 葡萄糖转运体实验 | 第42-43页 |
| 2.12 凝胶电泳实验 | 第43-44页 |
| 2.12.1 PCR实验反应体系及反应条件 | 第43页 |
| 2.12.2 琼脂糖凝胶电泳 | 第43-44页 |
| 2.13 统计学分析 | 第44-46页 |
| 3 结果 | 第46-56页 |
| 3.1 神经元细胞鉴定 | 第46-47页 |
| 3.1.1 NSE染色和MAP2免疫荧光染色鉴定提取的神经元细胞纯度及其生长状态. | 第46-47页 |
| 3.2 不同浓度的地塞米松药物作用神经元细胞 | 第47-49页 |
| 3.2.1 MTT实验检测经过不同浓度地塞米松作用后神经元细胞存活率 | 第47页 |
| 3.2.2 免疫荧光染色检测经过不同浓度地塞米松作用的神经元细胞的微管相关蛋白MAP2的表达 | 第47-49页 |
| 3.3 五味子醇甲对神经元作用机制的探讨 | 第49-56页 |
| 3.3.1 MAP2免疫荧光实验观察神经元细胞突起状态 | 第49-50页 |
| 3.3.2 凝胶电泳方法检测各组神经元微管相关蛋白MAP2mRNA和葡萄糖转运体GLU3mRNA的表达 | 第50-51页 |
| 3.3.3 .Real-timePCR实验检测各组神经元MAP2mRNA和GLU3mRNA的表达 | 第51-52页 |
| 3.3.4 WesternBlot检测各组神经元细胞Tau蛋白以及Tau蛋白不同位点的磷酸化水平和Tau蛋白糖基化水平 | 第52-54页 |
| 3.3.5 WesternBlot实验检测各组神经元细胞突触后致密蛋白的表达 | 第54-56页 |
| 讨论 | 第56-60页 |
| 结论 | 第60-62页 |
| 参考文献 | 第62-66页 |
| 综述 糖皮质激素对神经体统的影响及五味子醇甲神经保护作用可能的机制 | 第66-76页 |
| 参考文献 | 第72-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
