| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 英文缩略词 | 第8-11页 |
| 1 文献综述 | 第11-21页 |
| 1.1 红笛鲷 | 第11-12页 |
| 1.2 哈维氏弧菌研究简介 | 第12-14页 |
| 1.2.1 哈维氏弧菌生物学特性 | 第12页 |
| 1.2.2 哈维氏弧菌致病机理 | 第12页 |
| 1.2.3 哈维氏弧菌外膜蛋白 | 第12-14页 |
| 1.3 鱼类免疫反应和细胞因子的研究 | 第14-15页 |
| 1.3.1 鱼类免疫应答 | 第14页 |
| 1.3.2 鱼类细胞因子 | 第14-15页 |
| 1.3.3 白细胞介素-6 | 第15页 |
| 1.4 疫苗的研究进展 | 第15-19页 |
| 1.4.1 传统疫苗 | 第15-16页 |
| 1.4.2 基因工程疫苗 | 第16-17页 |
| 1.4.3 DNA疫苗分子免疫佐剂 | 第17页 |
| 1.4.4 DNA疫苗优缺点 | 第17-19页 |
| 1.5 本研究技术路线 | 第19-20页 |
| 1.6 本文研究的目的和意义 | 第20-21页 |
| 2 红笛鲷IL-6基因的克隆及表达分析 | 第21-51页 |
| 2.1 引言 | 第21页 |
| 2.2 实验材料 | 第21-23页 |
| 2.2.1 实验仪器 | 第21-22页 |
| 2.2.2 主要试剂 | 第22页 |
| 2.2.3 实验动物 | 第22页 |
| 2.2.4 质粒和受体菌 | 第22-23页 |
| 2.2.5 主要溶液和试剂的配制 | 第23页 |
| 2.3 实验方法 | 第23-37页 |
| 2.3.1 红笛鲷IL-6基因的克隆 | 第23-33页 |
| 2.3.2 红笛鲷IL-6基因的组织差异表达 | 第33-34页 |
| 2.3.3 红笛鲷IL-6基因的原核表达 | 第34-36页 |
| 2.3.4 鼠抗IL-6多克隆抗体的制备 | 第36页 |
| 2.3.5 免疫组织化学分析 | 第36-37页 |
| 2.4 结果与分析 | 第37-49页 |
| 2.4.1 IL-6基因的克隆结果分析 | 第37-43页 |
| 2.4.2 IL-6基因的差异表达分析 | 第43-45页 |
| 2.4.3 IL-6基因的原核表达结果分析 | 第45-47页 |
| 2.4.4 鼠抗多克隆抗体结果分析 | 第47-48页 |
| 2.4.5 免疫组化结果分析 | 第48-49页 |
| 2.5 讨论 | 第49-51页 |
| 3 IL6-OmpW嵌合基因表达载体的构建与表达 | 第51-60页 |
| 3.1 引言 | 第51页 |
| 3.2 实验材料 | 第51页 |
| 3.3 实验方法 | 第51-54页 |
| 3.3.1 OmpW基因的扩增 | 第51-52页 |
| 3.3.2 IL6-OmpW嵌合基因表达载体构建及表达 | 第52-54页 |
| 3.4 结果分析 | 第54-58页 |
| 3.4.1 重组质粒的双酶切鉴定 | 第54-55页 |
| 3.4.2 重组质粒的测序鉴定 | 第55-56页 |
| 3.4.3 基因的原核表达结果分析 | 第56-58页 |
| 3.5 讨论 | 第58-60页 |
| 4 DNA疫苗效果研究 | 第60-73页 |
| 4.1 引言 | 第60页 |
| 4.2 实验材料 | 第60-62页 |
| 4.2.1 质粒载体与菌株 | 第60-61页 |
| 4.2.2 实验鱼体 | 第61页 |
| 4.2.3 实验仪器及试剂 | 第61-62页 |
| 4.3 方法 | 第62-65页 |
| 4.3.1 重组真核表达质粒的构建 | 第62页 |
| 4.3.2 真核质粒的大量抽提 | 第62-63页 |
| 4.3.3 质粒纯度检测 | 第63页 |
| 4.3.4 实验鱼处理及免疫 | 第63页 |
| 4.3.5 mRNA水平检测各基因表达情况 | 第63-64页 |
| 4.3.6 DNA水平检测质粒转染 | 第64页 |
| 4.3.7 免疫各组红笛鲷血清抗体水平检测 | 第64页 |
| 4.3.8 Western-blot检测基因在红笛鲷体内的表达 | 第64页 |
| 4.3.9 鱼体攻毒保护实验 | 第64-65页 |
| 4.4 实验结果 | 第65-71页 |
| 4.4.1 重组质粒酶切鉴定 | 第65-66页 |
| 4.4.2 目的基因的RT-PCR检测结果 | 第66-67页 |
| 4.4.3 重组质粒在红笛鲷各组织的PCR检测 | 第67-68页 |
| 4.4.4 血清抗体效价检测 | 第68-69页 |
| 4.4.5 Western-blot结果 | 第69-70页 |
| 4.4.6 免疫保护率的计算 | 第70-71页 |
| 4.5 讨论 | 第71-73页 |
| 5 结论 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-83页 |
| 致谢 | 第83-84页 |
| 作者简历 | 第84-85页 |
| 导师简介 | 第85页 |