| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 缩略词 | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-32页 |
| 1.1 植物的先天免疫反应 | 第12-16页 |
| 1.1.1 PAMP激发的免疫反应 | 第12-13页 |
| 1.1.2 效应因子激发的免疫反应 | 第13-16页 |
| 1.1.3 植物先天免疫的共进化模型 | 第16页 |
| 1.2 拟南芥MAPK级联信号系统 | 第16-24页 |
| 1.2.1 MAPK级联系统的组成及作用特点 | 第16-19页 |
| 1.2.2 MAPK级联系统调节植物免疫反应 | 第19-22页 |
| 1.2.3 MAPK级联系统调节植物的生长发育 | 第22-23页 |
| 1.2.4 MAPK级联系统调节植物响应非生物胁迫 | 第23-24页 |
| 1.3 蛋白磷酸酶研究进展 | 第24-31页 |
| 1.3.1 蛋白磷酸酶的分类 | 第24-25页 |
| 1.3.2 丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶PP2A的组成和结构 | 第25-27页 |
| 1.3.3 拟南芥中PP2A的各亚基基因及生理功能 | 第27-29页 |
| 1.3.4 拟南芥中MAPKs的磷酸酶 | 第29-31页 |
| 1.4 本研究的目的和意义 | 第31-32页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第32-45页 |
| 2.1 实验材料及试剂 | 第32-33页 |
| 2.1.1 主要载体 | 第32页 |
| 2.1.2 菌株材料 | 第32页 |
| 2.1.3 植物材料 | 第32页 |
| 2.1.4 主要试剂 | 第32-33页 |
| 2.2 主要实验仪器 | 第33页 |
| 2.3 常用培养基及溶液 | 第33-34页 |
| 2.3.1 培养基配制 | 第33-34页 |
| 2.3.2 常用溶液配制 | 第34页 |
| 2.4 实验方法 | 第34-45页 |
| 2.4.1 种子消毒 | 第34-35页 |
| 2.4.2 植物材料的土培培养 | 第35页 |
| 2.4.3 拟南芥PP2A-4和MKK5等基因的克隆和相关载体的构建 | 第35-37页 |
| 2.4.4 酵母双杂交实验 | 第37-39页 |
| 2.4.5 原核重组蛋白的表达及纯化 | 第39-40页 |
| 2.4.6 GST Pull-down实验 | 第40页 |
| 2.4.7 烟草瞬时表达蛋白 | 第40-41页 |
| 2.4.8 植物可溶性总蛋白的提取 | 第41页 |
| 2.4.9 免疫共沉淀(Co-IP)实验 | 第41页 |
| 2.4.10 胶内激酶活性分析 | 第41-42页 |
| 2.4.11 SDS-PAGE与免疫印迹实验 | 第42页 |
| 2.4.12 双分子荧光互补实验 | 第42-43页 |
| 2.4.13 实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time quantitative PCR) | 第43页 |
| 2.4.14 激光扫描共聚焦荧光显微镜观察 | 第43-44页 |
| 2.4.15 GUS组织化学染色 | 第44页 |
| 2.4.16 胼胝质染色 | 第44页 |
| 2.4.17 细菌(Pseudomonas syringae pv maculicola,Psm ES4326)侵染实验 | 第44-45页 |
| 第三章 实验结果与分析 | 第45-64页 |
| 3.1 PP2A-4的组织表达模式及亚细胞定位 | 第45-47页 |
| 3.1.1 PP2A-4的组织表达模式 | 第45-46页 |
| 3.1.2 PP2A-4的亚细胞定位 | 第46-47页 |
| 3.2 PP2A-4基因的缺失促进拟南芥对细菌的免疫反应 | 第47-51页 |
| 3.2.1 PP2A-4基因T-DNA插入突变体的鉴定及互补植株的筛选 | 第47-48页 |
| 3.2.2 pp2a-4突变体中抗病基因转录上调 | 第48页 |
| 3.2.3 PP2A-4基因的缺失促进flg22诱导的胼胝质的积累 | 第48-50页 |
| 3.2.4 PP2A-4基因的缺失增强拟南芥对Psm ES4326的抗性 | 第50-51页 |
| 3.3 PP2A-4过表达抑制拟南芥对细菌的免疫反应 | 第51-54页 |
| 3.3.1 PP2A-4过表达不影响flg22诱导的胼胝质的积累 | 第51-53页 |
| 3.3.2 PP2A-4过表达抑制拟南芥对Psm ES4326的抗性 | 第53-54页 |
| 3.4 MKK5参与拟南芥免疫反应 | 第54-57页 |
| 3.4.1 诱导表达MKK5DD促进胼胝质的积累 | 第54-55页 |
| 3.4.2 MKK5调控拟南芥对Psm ES4326的抗性 | 第55-57页 |
| 3.5 PP2A-4与MKK5的相互作用 | 第57-61页 |
| 3.5.1 酵母双杂交实验证明PP2A-4与MKK5的相互作用 | 第57-58页 |
| 3.5.2 GST pull-down实验证明PP2A-4与MKK5的相互作用 | 第58-59页 |
| 3.5.3 双分子荧光互补实验证明PP2A-4与MKK5的相互作用 | 第59-60页 |
| 3.5.4 免疫共沉淀实验证明PP2A-4与MKK5的相互作用 | 第60-61页 |
| 3.6 PP2A-4通过去磷酸化MKK5抑制MKK5的激酶活性 | 第61-64页 |
| 3.6.1 PP2A-4在大肠杆菌中去磷酸化MKK5 | 第61页 |
| 3.6.2 PP2A-4的缺失抑制拟南芥中MPK3/MPK6的失活 | 第61-62页 |
| 3.6.3 PP2A-4抑制ΔMEKK1-MKK5级联对NtSIPK和NtWIPK的激活 | 第62-64页 |
| 第四章 讨论与展望 | 第64-68页 |
| 4.1 植物PP2A参与并负调控植株免疫反应 | 第64页 |
| 4.2 pp2a-3pp2a-4双敲除突变体植株发育异常 | 第64-66页 |
| 4.3 PP2A-4参与拟南芥先天免疫的工作模型 | 第66-67页 |
| 4.4 展望 | 第67-68页 |
| 第五章 结论 | 第68-70页 |
| 附录 拟南芥MKK9~(DD)可能通过RPP5介导细胞死亡的过程 | 第70-82页 |
| 参考文献 | 第82-93页 |
| 致谢 | 第93-96页 |
| 个人简历 | 第96页 |
