| 摘要 | 第3-5页 |
| abstract | 第5-6页 |
| 第1章 引言 | 第11-24页 |
| 1.1 烟草花叶病毒及其防治现状 | 第11-12页 |
| 1.2 抗烟草花叶病毒天然活性蛋白的研究现状 | 第12-14页 |
| 1.2.1 核糖体失活蛋白(Ribosomeinactivatingproteins,RIPs) | 第12-13页 |
| 1.2.2 蛋白激发子(ProteinElicitor) | 第13-14页 |
| 1.3 核糖体失活蛋白的概述 | 第14-16页 |
| 1.3.1 核糖体失活蛋白的分布 | 第14-15页 |
| 1.3.2 核糖体失活蛋白的分类与结构特点 | 第15-16页 |
| 1.3.3 核糖体失活蛋白的酶活性 | 第16页 |
| 1.4 几种核糖体失活蛋白及其抗植物病毒研究进展 | 第16-18页 |
| 1.4.1 核糖体失活蛋白的抗病毒活性 | 第16-17页 |
| 1.4.2 商陆抗病毒蛋白及其无毒突变体 | 第17页 |
| 1.4.3 苦瓜素(Alpha-momorcharin,а-MC) | 第17-18页 |
| 1.4.4 苦瓜毒蛋白MAP30(Momordicaanti-HIVproteinof30kDa) | 第18页 |
| 1.4.5 丝瓜核糖体失活蛋白 | 第18页 |
| 1.5 定点突变技术的研究现状 | 第18-21页 |
| 1.5.1 重叠延伸PCR(over-lapextensionPCR,OE-PCR)法 | 第18-19页 |
| 1.5.2 大引物PCR法(megaprimerPCR) | 第19-20页 |
| 1.5.3 全质粒的一步反向PCR突变方法 | 第20-21页 |
| 1.6 Y3蛋白的研究现状 | 第21-22页 |
| 1.7 研究内容与意义 | 第22-24页 |
| 1.7.1 研究内容 | 第22-23页 |
| 1.7.2 技术路线 | 第23页 |
| 1.7.3 研究意义 | 第23-24页 |
| 第2章 蛋白Y3基因的克隆及其突变体的获得 | 第24-40页 |
| 2.1 试验材料 | 第24-25页 |
| 2.1.1 菌种 | 第24页 |
| 2.1.2 主要仪器与设备 | 第24页 |
| 2.1.3 生物信息软件及网络资源 | 第24页 |
| 2.1.4 主要试剂及试剂盒 | 第24-25页 |
| 2.1.5 主要试剂的配制 | 第25页 |
| 2.2 试验方法 | 第25-31页 |
| 2.2.1 y3基因的克隆分析 | 第25-28页 |
| 2.2.2 y3基因突变体的获得 | 第28-31页 |
| 2.3 结果与分析 | 第31-39页 |
| 2.3.1 毛头鬼伞总RNA总RNA的提取 | 第31-32页 |
| 2.3.2 y3基因cDNA序列PCR扩增结果 | 第32页 |
| 2.3.3 重组质粒的菌液PCR鉴定 | 第32-33页 |
| 2.3.4 y3基因cDNA序列测序结果与分析 | 第33-34页 |
| 2.3.5 蛋白Y3中二硫键数目及位置预测 | 第34-37页 |
| 2.3.6 y3突变体上、下游片段的扩增 | 第37页 |
| 2.3.7 y3突变体的PCR扩增 | 第37-38页 |
| 2.3.8 y3基因突变体序列测序结果 | 第38-39页 |
| 2.4 小结与讨论 | 第39-40页 |
| 第3章 蛋白Y3及其突变体原核表达载体的构建及蛋白的诱导表达、纯化 | 第40-55页 |
| 3.1 试验材料 | 第40-42页 |
| 3.1.1 试验菌种和载体 | 第40页 |
| 3.1.2 主要仪器与设备 | 第40页 |
| 3.1.3 生物信息软件及网络资源 | 第40页 |
| 3.1.4 主要试剂及试剂盒 | 第40页 |
| 3.1.5 主要试剂的配制 | 第40-42页 |
| 3.2 试验方法 | 第42-47页 |
| 3.2.1 原核表达载体的构建 | 第42-43页 |
| 3.2.2 重组蛋白的诱导表达 | 第43-44页 |
| 3.2.3 细胞收集与破碎 | 第44-45页 |
| 3.2.4 各重组蛋白的纯化及条件优化 | 第45页 |
| 3.2.5 各重组蛋白的浓缩及bufferexchange | 第45-46页 |
| 3.2.6 各重组蛋白的标签蛋白切除 | 第46页 |
| 3.2.7 酶切后各重组蛋白的bufferexchange | 第46页 |
| 3.2.8 Y3蛋白粗提 | 第46-47页 |
| 3.3 结果与分析 | 第47-53页 |
| 3.3.1 y3、y3t1及y3t2重组质粒的菌液PCR验证 | 第47-48页 |
| 3.3.2 各重组蛋白的诱导表达及条件优化 | 第48-50页 |
| 3.3.3 各融合蛋白的纯化 | 第50-51页 |
| 3.3.4 各重组蛋白标签蛋白的切除 | 第51-52页 |
| 3.3.5 毛头鬼伞子实体中Y3蛋白的粗提 | 第52-53页 |
| 3.4 小结与讨论 | 第53-55页 |
| 第4章 重组蛋白DNA-nuclease活性和RNAN-糖苷酶活性检测 | 第55-64页 |
| 4.1 试验材料 | 第55-56页 |
| 4.1.1 质粒和各种蛋白 | 第55页 |
| 4.1.2 试验所需仪器设备 | 第55页 |
| 4.1.3 主要试剂与试剂盒 | 第55页 |
| 4.1.4 主要试剂的配制 | 第55-56页 |
| 4.2 试验方法 | 第56-58页 |
| 4.2.1 蛋白DNA-nuclease活性检测 | 第56-57页 |
| 4.2.2 蛋白RNAN-糖苷酶活性检测 | 第57-58页 |
| 4.3 结果与分析 | 第58-62页 |
| 4.3.1 Y3蛋白及各重组蛋白DNA-nuclease活性检测 | 第58-61页 |
| 4.3.2 Y3蛋白及各重组蛋白RNAN-糖苷酶活性检测 | 第61-62页 |
| 4.4 小结与讨论 | 第62-64页 |
| 第5章 各重组蛋白对TMV的抑制作用 | 第64-73页 |
| 5.1 试验材料 | 第64页 |
| 5.1.1 烟草植株和TMV | 第64页 |
| 5.1.2 试剂盒 | 第64页 |
| 5.1.3 主要仪器设备 | 第64页 |
| 5.1.4 溶液配制 | 第64页 |
| 5.2 试验方法 | 第64-66页 |
| 5.2.1 TMV的提取 | 第64-65页 |
| 5.2.2 ELISA检测TMV的含量 | 第65页 |
| 5.2.3 测定各蛋白对TMV的抑制作用 | 第65-66页 |
| 5.3 结果分析 | 第66-71页 |
| 5.3.1 测定结果的有效性分析 | 第66-67页 |
| 5.3.2 测定各蛋白对TMV体外活性的抑制作用 | 第67-69页 |
| 5.3.3 测定各蛋白对TMV体内抑制作用 | 第69-71页 |
| 5.4 小结与讨论 | 第71-73页 |
| 第6章 结论与展望 | 第73-76页 |
| 6.1 结论 | 第73-74页 |
| 6.1.1 蛋白Y3基因cDNA序列的克隆和分析 | 第73页 |
| 6.1.2 基因y3的突变体的获得、原核表达载体的构建及蛋白诱导表达纯化 | 第73页 |
| 6.1.3 蛋白Y3及各重组蛋白DNA-nuclease活性和RNAN-糖苷酶活性检测 | 第73-74页 |
| 6.1.4 蛋白Y3及各重组蛋白的抗TMV活性 | 第74页 |
| 6.2 展望 | 第74-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-82页 |
