| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 符号说明 | 第10-12页 |
| 文献综述 | 第12-23页 |
| 1.1 奶牛乳房炎概述 | 第12页 |
| 1.2 引起乳房炎的病原菌 | 第12-14页 |
| 1.3 乳房炎的治疗方法 | 第14-15页 |
| 1.4 MRSA的耐药机制 | 第15-17页 |
| 1.5 MRSA常用分型方法 | 第17-19页 |
| 1.6 金黄色葡萄球菌毒力因子简介 | 第19-21页 |
| 1.7 本研究的目的和意义 | 第21-23页 |
| 研究一 奶牛乳房炎中葡萄球菌的分离鉴定及耐药性分析 | 第23-33页 |
| 1 材料 | 第23-25页 |
| 1.1 奶样 | 第23页 |
| 1.2 所用抗生素 | 第23-24页 |
| 1.3 试剂与耗材 | 第24-25页 |
| 1.4 主要仪器和设备 | 第25页 |
| 2 方法 | 第25-28页 |
| 2.1 主要试剂的配制 | 第25-26页 |
| 2.2 奶样的处理 | 第26-27页 |
| 2.3 MBT全自动快速质谱检测系统鉴定 | 第27页 |
| 2.4 葡萄球菌药敏试验 | 第27-28页 |
| 3 结果 | 第28-31页 |
| 3.1 细菌分离鉴定结果 | 第28-29页 |
| 3.2 葡萄球菌药敏结果 | 第29-31页 |
| 4 讨论 | 第31-33页 |
| 4.1 奶牛乳房炎病原微生物的流行与分析 | 第31页 |
| 4.2 奶牛源葡萄球菌耐药性分析 | 第31-33页 |
| 研究二 MRSA的分离鉴定及不同ST型耐药差异性分析 | 第33-43页 |
| 1 材料 | 第33-35页 |
| 1.1 试剂 | 第33页 |
| 1.2 基因组 | 第33页 |
| 1.3 引物与序列 | 第33-35页 |
| 1.4 主要仪器和设备 | 第35页 |
| 2 方法 | 第35-37页 |
| 2.1 葡萄球菌基因组提取 | 第35-36页 |
| 2.2 三重PCR筛选MRSA | 第36页 |
| 2.3 数据分析 | 第36-37页 |
| 2.4 PCR扩增7个管家基因 | 第37页 |
| 2.5 测序结果处理 | 第37页 |
| 3 结果 | 第37-41页 |
| 3.1 MRSA分离结果及其与MRCNS耐药性的比较 | 第37-38页 |
| 3.2 MRSA的ST型 | 第38-39页 |
| 3.3 不同ST型MRSA的耐药特征 | 第39-41页 |
| 4 讨论 | 第41-43页 |
| 4.1 江苏地区奶牛源MRSA的流行情况分析 | 第41-42页 |
| 4.2 江苏地区奶牛源MRSA耐药性分析 | 第42-43页 |
| 研究三 金黄色葡萄球菌中nuc基因对其耐药性潜在作用的探究 | 第43-52页 |
| 1 材料 | 第43-45页 |
| 1.1 试剂及配制 | 第43-44页 |
| 1.2 菌株和质粒 | 第44页 |
| 1.3 基因组 | 第44页 |
| 1.4 引物与序列 | 第44-45页 |
| 1.5 主要仪器和设备 | 第45页 |
| 2 方法 | 第45-49页 |
| 2.1 nuc基因上下游同源片段的扩增 | 第45页 |
| 2.2 nuc上、下游片段的融合 | 第45-46页 |
| 2.3 Gateway克隆构建同源重组质粒pKOR1-Δnuc | 第46页 |
| 2.4 金黄色葡萄球菌RN4220、MP0046感受态的制备 | 第46-47页 |
| 2.5 金黄色葡萄球菌电转化试验 | 第47页 |
| 2.6 金黄色葡萄球菌质粒提取 | 第47-48页 |
| 2.7 nuc基因敲除突变株的筛选与鉴定 | 第48-49页 |
| 2.8 nuc基因敲除突变株药物敏感性检测 | 第49页 |
| 3 结果 | 第49-51页 |
| 3.1 同源区域融合片段的获得 | 第49页 |
| 3.2 重组质粒pKOR1-Δnuc的鉴定 | 第49-50页 |
| 3.3 金黄色葡萄球菌nuc基因突变株的鉴定 | 第50页 |
| 3.4 nuc基因敲除突变株药物敏感性变化 | 第50-51页 |
| 4 讨论 | 第51-52页 |
| 全文总结 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-59页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第59-60页 |
| 致谢 | 第60-62页 |
