| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第14-40页 |
| 1.1 脂肪酶 | 第14-19页 |
| 1.1.1 脂肪酶简介 | 第14-15页 |
| 1.1.2 脂肪酶的结构特征与催化机制 | 第15-17页 |
| 1.1.3 脂肪酶分子生物学研究进展 | 第17-19页 |
| 1.2 微生物脂肪酶的性质与应用 | 第19-29页 |
| 1.2.1 微生物脂肪酶的性质 | 第19-26页 |
| 1.2.2 微生物脂肪酶的应用 | 第26-29页 |
| 1.3 异源表达系统简介 | 第29-35页 |
| 1.3.1 大肠杆菌表达系统 | 第29-31页 |
| 1.3.2 毕赤酵母表达系统 | 第31-35页 |
| 1.4 酶法合成棕榈酸乙酯 | 第35-39页 |
| 1.4.1 非水介质中脂肪酶催化酯合成 | 第35-36页 |
| 1.4.2 影响非水介质中脂肪酶催化酯合成的因素 | 第36-37页 |
| 1.4.3 酶法合成酯类的研究进展 | 第37-38页 |
| 1.4.4 棕榈酸乙酯合成方法研究进展 | 第38-39页 |
| 1.5 本课题的研究意义及主要研究内容 | 第39-40页 |
| 1.5.1 主要研究内容 | 第39页 |
| 1.5.2 研究意义 | 第39-40页 |
| 第二章 类芽孢杆菌属脂肪酶在大肠杆菌中的克隆及高效表达 | 第40-57页 |
| 2.1 实验材料与设备 | 第40-44页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第40页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第40-41页 |
| 2.1.3 培养基的配制 | 第41-42页 |
| 2.1.4 缓冲液的配制 | 第42-43页 |
| 2.1.5 实验仪器与设备 | 第43-44页 |
| 2.1.6 生物信息学工具 | 第44页 |
| 2.2 实验方法 | 第44-51页 |
| 2.2.1 序列同源性分析 | 第44页 |
| 2.2.2 引物设计 | 第44页 |
| 2.2.3 表达载体pET-28a-lp2252的构建 | 第44-46页 |
| 2.2.4 重组质粒的转化 | 第46-47页 |
| 2.2.5 重组子的筛选与鉴定 | 第47-49页 |
| 2.2.6 目的基因在大肠杆菌中的诱导表达 | 第49页 |
| 2.2.7 重组脂肪酶Elp2252粗酶液的制备 | 第49页 |
| 2.2.8 脂肪酶酶活力测定 | 第49页 |
| 2.2.9 蛋白浓度的测定 | 第49-50页 |
| 2.2.10 SDS-PAGE鉴定蛋白纯度 | 第50页 |
| 2.2.11 表达条件的优化 | 第50-51页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第51-56页 |
| 2.3.1 脂肪酶lp2252基因序列生物信息学分析 | 第51-52页 |
| 2.3.2 表达载体pET-28a-lp2252的构建 | 第52页 |
| 2.3.3 重组菌株BL21(DE3)(pET-28a-lp2252)的表达 | 第52-53页 |
| 2.3.4 重组菌株BL21(DE3)(pET-28a-lp2252)表达条件的优化 | 第53-56页 |
| 2.4 本章小结 | 第56-57页 |
| 第三章 重组脂肪酶Elp2252的分离纯化与酶学性质研究 | 第57-70页 |
| 3.1 实验材料与设备 | 第57-59页 |
| 3.1.1 实验菌株 | 第57页 |
| 3.1.2 实验试剂 | 第57-58页 |
| 3.1.3 培养基配制 | 第58页 |
| 3.1.4 缓冲液配制 | 第58-59页 |
| 3.1.5 实验仪器与设备 | 第59页 |
| 3.2 实验方法 | 第59-61页 |
| 3.2.1 微生物培养 | 第59页 |
| 3.2.2 Ni离子柱亲和层析 | 第59页 |
| 3.2.3 温度对重组脂肪酶Elp2252酶活力及稳定性影响 | 第59-60页 |
| 3.2.4 pH对重组脂肪酶Elp2252酶活力及稳定性影响 | 第60页 |
| 3.2.5 金属离子和化学试剂对重组脂肪酶Elp2252酶活力的影响 | 第60页 |
| 3.2.6 重组脂肪酶Elp2252底物特异性研究 | 第60页 |
| 3.2.7 重组脂肪酶Elp2252动力学参数的研究 | 第60页 |
| 3.2.8 有机溶剂对重组脂肪酶Elp2252酶活力的影响 | 第60-61页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第61-68页 |
| 3.3.1 重组脂肪酶Elp2252的分离纯化 | 第61页 |
| 3.3.2 温度对重组脂肪酶Elp2252酶活力及稳定性的影响 | 第61-62页 |
| 3.3.3 pH对重组脂肪酶Elp2252酶活力及温度稳定性的影响 | 第62-63页 |
| 3.3.4 金属离子和化学试剂对重组脂肪酶Elp2252酶活的影响 | 第63-65页 |
| 3.3.5 重组脂肪酶Elp2252的底物特异性 | 第65-66页 |
| 3.3.6 重组脂肪酶Elp2252的动力学研究 | 第66-67页 |
| 3.3.7 有机溶剂对重组脂肪酶Elp2252的影响 | 第67-68页 |
| 3.4 本章小结 | 第68-70页 |
| 第四章 类芽孢杆菌属脂肪酶在毕赤酵母中的表达 | 第70-84页 |
| 4.1 实验材料与设备 | 第70-73页 |
| 4.1.1 菌株与质粒 | 第70页 |
| 4.1.2 实验试剂 | 第70-71页 |
| 4.1.3 培养基的配制 | 第71-72页 |
| 4.1.4 溶液的配制 | 第72-73页 |
| 4.1.5 实验仪器与设备 | 第73页 |
| 4.2 实验方法 | 第73-78页 |
| 4.2.1 引物设计 | 第73页 |
| 4.2.2 目的片段的扩增 | 第73页 |
| 4.2.3 表达载体pPICZaA-lp2252的构建 | 第73页 |
| 4.2.4 表达载体在毕赤酵母X33中的同源重组 | 第73-76页 |
| 4.2.5 目的基因在毕赤酵母中的诱导表达 | 第76页 |
| 4.2.6 盐析和透析 | 第76页 |
| 4.2.7 脂肪酶酶活力及蛋白质浓度的测定 | 第76-77页 |
| 4.2.8 SDS-PAGE鉴定蛋白纯度 | 第77页 |
| 4.2.9 温度对重组脂肪酶Ylp2252酶活力及稳定性的影响 | 第77页 |
| 4.2.10 pH对重组脂肪酶Ylp2252酶活力及稳定性的影响 | 第77页 |
| 4.2.11 金属离子和化学试剂对重组脂肪酶Ylp2252酶活力的影响 | 第77页 |
| 4.2.12 重组脂肪酶Ylp2252底物特异性研究 | 第77-78页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第78-83页 |
| 4.3.1 表达载体pPICZaA-lp2252的构建 | 第78页 |
| 4.3.2 重组菌株X33(pPICZaA-lp2252)的表达 | 第78-79页 |
| 4.3.3 重组脂肪酶Ylp2252的分离纯化 | 第79-80页 |
| 4.3.4 温度对重组脂肪酶Ylp2252酶活力和稳定性的影响 | 第80页 |
| 4.3.5 pH对重组脂肪酶Ylp2252酶活力和稳定性的影响 | 第80-81页 |
| 4.3.6 金属离子及化学试剂对重组脂肪酶Ylp2252酶活的影响 | 第81-83页 |
| 4.3.7 重组脂肪酶Ylp2252的底物特异性 | 第83页 |
| 4.4 本章小结 | 第83-84页 |
| 第五章 重组脂肪酶Elp2252催化合成棕榈酸乙酯 | 第84-93页 |
| 5.1 实验材料与设备 | 第84-85页 |
| 5.1.1 实验试剂 | 第84页 |
| 5.1.2 实验仪器与设备 | 第84-85页 |
| 5.2 实验方法 | 第85-86页 |
| 5.2.1 脂肪酶Elp2252催化合成棕榈酸乙酯实验 | 第85页 |
| 5.2.2 棕榈酸乙酯含量的测定 | 第85-86页 |
| 5.2.3 棕榈酸乙酯的纯化 | 第86页 |
| 5.2.4 棕榈酸乙酯的表征 | 第86页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第86-91页 |
| 5.3.1 傅里叶红外光谱(FTIR)分析 | 第86页 |
| 5.3.2 核磁共振(NMR)分析 | 第86-88页 |
| 5.3.3 底物摩尔比对脂肪酶合成棕榈酸乙酯的影响 | 第88-89页 |
| 5.3.4 反应温度对脂肪酶合成棕榈酸乙酯的影响 | 第89页 |
| 5.3.5 反应体系含水量对脂肪酶合成棕榈酸乙酯的影响 | 第89-90页 |
| 5.3.6 反应时间对脂肪酶合成棕榈酸乙酯的影响 | 第90-91页 |
| 5.3.7 加酶量对脂肪酶合成棕榈酸乙酯的影响 | 第91页 |
| 5.4 本章小结 | 第91-93页 |
| 结论与展望 | 第93-95页 |
| 结论 | 第93-94页 |
| 创新性 | 第94页 |
| 展望 | 第94-95页 |
| 参考文献 | 第95-107页 |
| 附录 | 第107-110页 |
| 附录一 基因序列 | 第107-108页 |
| 附录二 校正曲线 | 第108-109页 |
| 附录三 中英文缩略表 | 第109-110页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第110-111页 |
| 致谢 | 第111-112页 |
| 附件 | 第112页 |
