| 摘要 | 第5-8页 |
| abstract | 第8-10页 |
| 第一章 绪论 | 第15-26页 |
| 1.1 哺乳动物IL-1β的免疫调节功能及其作用机制 | 第15-17页 |
| 1.1.1 IL-1β与炎症反应 | 第15-16页 |
| 1.1.2 IL-1β与免疫细胞 | 第16-17页 |
| 1.1.3 IL-1β基因敲除小鼠的免疫功能变化 | 第17页 |
| 1.2 哺乳动物IL-1β的诱导表达及其调控机制 | 第17-22页 |
| 1.2.1 IL-1β的成熟过程与信号传导 | 第17-19页 |
| 1.2.2 哺乳动物炎症反应中IL-1β的诱导表达机制 | 第19-20页 |
| 1.2.3 哺乳动物IL-1β的负调控机制 | 第20-22页 |
| 1.3 鱼类IL-1β的研究进展 | 第22-23页 |
| 1.4 本项研究的意义 | 第23-24页 |
| 1.5 论文研究思路 | 第24-26页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第26-33页 |
| 2.1 实验动物 | 第26页 |
| 2.2 RNA的提取 | 第26页 |
| 2.3 cDNA第一链的合成 | 第26页 |
| 2.4 部分cDNA序列的克隆 | 第26-27页 |
| 2.5 cDNA序列的 3’-和 5’-RACE克隆 | 第27页 |
| 2.6 草鱼头肾白细胞（HKL）的分离制备 | 第27-28页 |
| 2.7 嗜水气单胞菌草鱼活体感染实验 | 第28页 |
| 2.8 荧光定量PCR | 第28页 |
| 2.9 重组蛋白的原核表达与纯化 | 第28-30页 |
| 2.9.1 蛋白表达载体的构建 | 第28-29页 |
| 2.9.2 重组蛋白的诱导表达 | 第29页 |
| 2.9.3 重组蛋白的纯化 | 第29-30页 |
| 2.10 多克隆抗体的制备 | 第30页 |
| 2.11 抗体标记辣根过氧化物酶 | 第30页 |
| 2.12 免疫印迹法（Western Blot,WB） | 第30-31页 |
| 2.13 细胞活性检测 | 第31页 |
| 2.14 基于ELISA的体外蛋白结合实验 | 第31页 |
| 2.15 生物信息学分析 | 第31页 |
| 2.16 统计学方法 | 第31-33页 |
| 第三章 炎症条件下草鱼IL-1Β的诱导表达 | 第33-43页 |
| 3.1 概述 | 第33-34页 |
| 3.2 材料与方法 | 第34-35页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第34页 |
| 3.2.2 草鱼IL-1β的基因克隆 | 第34-35页 |
| 3.2.2.1 部分草鱼IL-1β cDNA序列的克隆 | 第34页 |
| 3.2.2.2 IL-1β cDNA序列的 3’-和 5’-RACE克隆 | 第34-35页 |
| 3.2.3 草鱼IL-1β基因的荧光定量PCR检测 | 第35页 |
| 3.2.4 草鱼IL-1β的体外诱导表达 | 第35页 |
| 3.2.5 草鱼IL-1β体内感染下的诱导表达 | 第35页 |
| 3.2.6 生物信息学分析 | 第35页 |
| 3.2.7 统计学方法 | 第35页 |
| 3.3 结果 | 第35-41页 |
| 3.3.1 草鱼IL-1β cDNA的序列与结构分析 | 第35-39页 |
| 3.3.2 草鱼IL-1β的组织分布 | 第39-40页 |
| 3.3.3 草鱼IL-1β的体外诱导表达 | 第40-41页 |
| 3.3.4 草鱼IL-1β体内感染下的诱导表达 | 第41页 |
| 3.4 讨论 | 第41-42页 |
| 3.5 本章小结 | 第42-43页 |
| 第四章 草鱼IL-1Β的自我诱导表达 | 第43-52页 |
| 4.1 概述 | 第43-44页 |
| 4.2 材料与方法 | 第44-45页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第44页 |
| 4.2.2 草鱼IL-1β蛋白的原核表达与纯化 | 第44页 |
| 4.2.2.1 草鱼IL-1β表达载体（pET30a(+)-IL-1β）的构建 | 第44页 |
| 4.2.2.2 重组草鱼IL-1β蛋白的表达 | 第44页 |
| 4.2.2.3 重组草鱼IL-1β蛋白的纯化 | 第44页 |
| 4.2.3 抗体辣根过氧化物酶的标记 | 第44-45页 |
| 4.2.4 重组草鱼IL-1β的活性鉴定 | 第45页 |
| 4.2.5 草鱼IL-1β多克隆抗体的鉴定 | 第45页 |
| 4.2.6 生物信息学分析 | 第45页 |
| 4.2.7 统计学方法 | 第45页 |
| 4.3 结果 | 第45-50页 |
| 4.3.1 草鱼IL-1β的重组表达 | 第45-46页 |
| 4.3.2 重组草鱼IL-1β蛋白的活性鉴定 | 第46-47页 |
| 4.3.3 草鱼IL-1β多克隆抗体的鉴定 | 第47-48页 |
| 4.3.4 重组草鱼IL-1β蛋白对自身的诱导表达及其信号通路 | 第48-50页 |
| 4.4 讨论 | 第50-51页 |
| 4.5 本章小结 | 第51-52页 |
| 第五章 草鱼IL-1 受体II的分离鉴定及其对IL-1β诱导表达的负调控作用 | 第52-66页 |
| 5.1 概述 | 第52-53页 |
| 5.2 材料与方法 | 第53-55页 |
| 5.2.1 实验材料 | 第53页 |
| 5.2.2 基因克隆 | 第53-54页 |
| 5.2.2.1 部分草鱼IL-1RII cDNA序列的克隆 | 第53页 |
| 5.2.2.2 IL-1RII cDNA序列的 3’-和 5’-RACE克隆 | 第53-54页 |
| 5.2.3 草鱼IL-1RII基因的荧光定量PCR检测 | 第54页 |
| 5.2.4 草鱼IL-1RII在炎症反应下的诱导表达 | 第54页 |
| 5.2.5 重组草鱼IL-1β对IL-1RII表达的影响及其细胞信号通路 | 第54页 |
| 5.2.6 草鱼IL-1RII胞外区的原核表达与纯化 | 第54-55页 |
| 5.2.6.1 草鱼IL-1RII表达载体（pGEX-4T1IL-1RII）的构建 | 第54-55页 |
| 5.2.6.2 重组草鱼IL-1RII蛋白的表达 | 第55页 |
| 5.2.6.3 重组草鱼IL-1RII蛋白的纯化 | 第55页 |
| 5.2.7 重组草鱼IL-1RII与重组草鱼IL-1β的体外结合实验 | 第55页 |
| 5.2.8 重组草鱼IL-1RII对IL-1β自身诱导表达的影响 | 第55页 |
| 5.2.9 生物信息学分析 | 第55页 |
| 5.2.10 统计学方法 | 第55页 |
| 5.3 结果 | 第55-64页 |
| 5.3.1 草鱼IL-1RII cDNA的结构与序列分析 | 第55-59页 |
| 5.3.2 IL-1RII的组织分布 | 第59页 |
| 5.3.3 草鱼IL-1RII在炎症反应下的诱导表达 | 第59-60页 |
| 5.3.4 重组草鱼IL-1β对IL-1RII表达的影响及其细胞信号通路 | 第60-61页 |
| 5.3.5 草鱼IL-1RII胞外区的重组表达 | 第61-62页 |
| 5.3.6 重组草鱼IL-1RII胞外区与重组草鱼IL-1β的体外结合实验 | 第62-63页 |
| 5.3.7 重组草鱼IL-1RII对IL-1β自身诱导表达的影响 | 第63-64页 |
| 5.4 讨论 | 第64-65页 |
| 5.5 本章小结 | 第65-66页 |
| 第六章 草鱼抑炎症因子对IL-1Β诱导表达的负调控作用 | 第66-81页 |
| 6.1 概述 | 第66-67页 |
| 6.2 材料与方法 | 第67-68页 |
| 6.2.1 实验材料 | 第67页 |
| 6.2.2 基因克隆 | 第67页 |
| 6.2.2.1 部分草鱼IL-1RI cDNA序列的克隆 | 第67页 |
| 6.2.2.2 部分草鱼IL-1RAcP cDNA序列的克隆 | 第67页 |
| 6.2.3 荧光定量PCR | 第67-68页 |
| 6.2.4 抗体中和实验 | 第68页 |
| 6.2.5 IκB磷酸化的免疫印迹实验 | 第68页 |
| 6.2.6 生物信息学分析 | 第68页 |
| 6.2.7 统计学方法 | 第68页 |
| 6.3 结果 | 第68-77页 |
| 6.3.1 草鱼TGF-β1 在炎症反应下的诱导表达 | 第68-69页 |
| 6.3.2 重组草鱼IL-1β对TGF-β1 基因表达的影响及其信号通路 | 第69-71页 |
| 6.3.3 草鱼TGF-β1 的中和抗体延长IL-1β对自身基因的诱导表达 | 第71-72页 |
| 6.3.4 重组草鱼TGF-β1 降低草鱼IL-1β的自我诱导表达作用 | 第72-73页 |
| 6.3.5 重组TGF-β1 对重组IL-1β激活的NFκB信号通路的影响 | 第73-74页 |
| 6.3.6 重组TGF-β1 对重组IL-1β诱导IL-1 受体基因表达的影响 | 第74-75页 |
| 6.3.7 IL-1β上调TGF-β1 受体ALK5的表达 | 第75-76页 |
| 6.3.8 IL-1β增强TGF-β1 信号通路 | 第76-77页 |
| 6.3.9 重组TGF-β1 对嗜水气单胞菌感染诱导IL-1β表达的影响 | 第77页 |
| 6.4 讨论 | 第77-80页 |
| 6.5 本章小结 | 第80-81页 |
| 第七章 结论与展望 | 第81-83页 |
| 致谢 | 第83-84页 |
| 参考文献 | 第84-100页 |
| 攻读博士学位期间取得的成果 | 第100-101页 |
