| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 符号说明 | 第9-10页 |
| 第一章 背景与综述 | 第10-21页 |
| 1 双特异性抗体的研究进展 | 第10-12页 |
| 1.1 双特异性抗体的概述 | 第10页 |
| 1.2 双特异性抗体的类型及制备方法 | 第10-12页 |
| 1.3 双特异性抗体的作用机制 | 第12页 |
| 2 乳腺生物反应器的研究 | 第12-14页 |
| 3 定位整合转基因山羊的研究 | 第14-17页 |
| 3.1 转基因山羊的概述及制备方法 | 第14-15页 |
| 3.2 定位整合转基因山羊的研究 | 第15-16页 |
| 3.3 Cre重组酶介导的定位重组系统的研究 | 第16-17页 |
| 4 黑色素瘤及CD28的介绍 | 第17-18页 |
| 5 研究目的及意义 | 第18-20页 |
| 6 技术路线 | 第20-21页 |
| 第二章 GN2017双特异性抗体基因的设计 | 第21-29页 |
| 1 材料与方法 | 第21页 |
| 2 结果与讨论 | 第21-29页 |
| 2.1 GN2017双特异性抗体minigene设计 | 第21-23页 |
| 2.2 GN2017 minigene的表达预测 | 第23-29页 |
| 第三章 GN2017系列双特异性抗体基因的载体制备与优选 | 第29-45页 |
| 1 实验材料 | 第29-30页 |
| 1.1 材料 | 第29页 |
| 1.2 主要仪器 | 第29-30页 |
| 2 方法 | 第30-35页 |
| 2.1 双特异性抗体GN2017m表达质粒的构建 | 第30-31页 |
| 2.2 双特异性抗体GN2017R、GN2017R4和GN2017表达质粒构建 | 第31-33页 |
| 2.3 四种双特异性抗体表达检测 | 第33-35页 |
| 3 结果 | 第35-43页 |
| 3.1 双特异性抗体GN2017m表达质粒的构建 | 第35-36页 |
| 3.2 双特异性抗体GN2017R、GN2017R4和GN2017表达质粒构建 | 第36-39页 |
| 3.3 四种双特异性抗体表达检测 | 第39-43页 |
| 4 讨论 | 第43-45页 |
| 第四章 定位整合质粒pTM-GN2017R4的构建及整合克隆细胞的筛选 | 第45-54页 |
| 1 材料与方法 | 第45-47页 |
| 1.1 材料 | 第45页 |
| 1.2 方法 | 第45-47页 |
| 2 结果 | 第47-53页 |
| 2.1 定位整合质粒pTM-GN2017R4的构建 | 第47-50页 |
| 2.2 定位整合细胞的获得和筛选 | 第50-53页 |
| 3 讨论 | 第53-54页 |
| 第五章 体细胞核移植制备转基因山羊及小羊胚胎的鉴定 | 第54-62页 |
| 1 实验材料 | 第54页 |
| 1.1 材料 | 第54页 |
| 1.2 主要仪器 | 第54页 |
| 2 方法 | 第54-56页 |
| 2.1 卵母细胞制备与受体羊的同步 | 第54-55页 |
| 2.2 克隆细胞株的饥饿处理 | 第55页 |
| 2.3 重构胚的制备与激活 | 第55-56页 |
| 2.4 重构胚的移植 | 第56页 |
| 2.5 受体母羊妊娠检查 | 第56页 |
| 2.6 体细胞克隆pTM-GN2017R4羊胎儿整合检测 | 第56页 |
| 3 结果 | 第56-60页 |
| 3.1 体细胞克隆法制备转基因山羊 | 第56-59页 |
| 3.2 体细胞克隆GN2017R4羊胎儿整合检测 | 第59-60页 |
| 4 讨论 | 第60-62页 |
| 4.1 体细胞对体细胞克隆的影响 | 第60-61页 |
| 4.2 核移植与胚胎发育 | 第61页 |
| 4.3 小羊胚胎的鉴定 | 第61-62页 |
| 全文总结 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-69页 |
| 附录Ⅰ 溶液配方 | 第69-71页 |
| 附录Ⅱ 攻读学位期间发表的学术论文 | 第71-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
