| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 英文縮略词对照表 | 第7-9页 |
| 目录 | 第9-12页 |
| 第1章 文献综述 | 第12-24页 |
| 1.1 瞬时表达系统 | 第12-13页 |
| 1.2 瞬时表达系统的特点 | 第13页 |
| 1.3 瞬时表达外源基因的方法 | 第13-20页 |
| 1.3.1 DNA直接导入法 | 第13-15页 |
| 1.3.2 病毒介导的瞬时转化法 | 第15-16页 |
| 1.3.3 农杆菌介导的瞬时转化法 | 第16-20页 |
| 1.4 瞬时表达系统的应用 | 第20-22页 |
| 1.4.1 生物制剂的生产 | 第20页 |
| 1.4.2 转录元件和转录因子的克隆与分析 | 第20-21页 |
| 1.4.3 基因沉默 | 第21页 |
| 1.4.4 亚细胞定位 | 第21页 |
| 1.4.5 蛋白质互作分析 | 第21-22页 |
| 1.4.6 植物品种的改良和选育 | 第22页 |
| 1.5 本研究的目的和意义 | 第22-24页 |
| 第2章 棉花子叶瞬时表达系统的建立及优化 | 第24-44页 |
| 2.1 实验材料 | 第24-27页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第24页 |
| 2.1.2 载体和宿主菌 | 第24页 |
| 2.1.3 实验试剂 | 第24-26页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第26-27页 |
| 2.2 实验方法 | 第27-30页 |
| 2.2.1 农杆菌感受态细胞的制备及质粒的转化 | 第27页 |
| 2.2.2 PCR扩增 | 第27-28页 |
| 2.2.3 转化液制备 | 第28页 |
| 2.2.4 子叶注射及共培养 | 第28-29页 |
| 2.2.5 GUS染色 | 第29页 |
| 2.2.6 GUS蛋白定量分析 | 第29-30页 |
| 2.3 结果与分析 | 第30-41页 |
| 2.3.1 GUS染色及菌种活力测定 | 第30-31页 |
| 2.3.2 棉花瞬时转化叶片材料的确定 | 第31-32页 |
| 2.3.3 棉花子叶注射农杆菌的浓度筛选 | 第32-33页 |
| 2.3.4 棉花子叶农杆菌注射量的筛选 | 第33-34页 |
| 2.3.5 棉花子叶生长苗龄的筛选 | 第34-35页 |
| 2.3.6 共培养天数的筛选 | 第35-36页 |
| 2.3.7 棉花子叶瞬时表达系统各项指标的正交分析 | 第36-40页 |
| 2.3.8 两种农杆菌菌株在瞬时转化系统中的效果比对 | 第40-41页 |
| 2.4 讨论 | 第41-44页 |
| 第3章 利用棉花子叶瞬时表达系统检测启动子活性及亚细胞定位 | 第44-58页 |
| 3.1 材料、菌种、试剂与仪器 | 第44-46页 |
| 3.1.1 植物材料、 | 第44页 |
| 3.1.2 载体和宿主菌 | 第44页 |
| 3.1.3 实验试剂 | 第44-45页 |
| 3.1.4 仪器 | 第45-46页 |
| 3.2 实验方法 | 第46-50页 |
| 3.2.1 Ghpprl-pART27表达载体构建 | 第46页 |
| 3.2.2 目的片段的回收及纯化 | 第46-47页 |
| 3.2.3 目的片段与pEASYTM-T5 Zero载体的连接 | 第47页 |
| 3.2.4 大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第47-48页 |
| 3.2.5 质粒小量提取 | 第48页 |
| 3.2.6 质粒的酶切验证 | 第48-49页 |
| 3.2.7 农杆菌感受态细胞的制备及质粒的转化 | 第49页 |
| 3.2.8 瞬时表达外源基因的胁迫诱导及观察 | 第49页 |
| 3.2.9 亚细胞定位载体对子叶的注射及观察 | 第49-50页 |
| 3.3 实验结果 | 第50-56页 |
| 3.3.1 D-7启动子活性分析 | 第50-51页 |
| 3.3.2 PPR蛋白的亚细胞定位研究 | 第51-56页 |
| 3.4 讨论 | 第56-58页 |
| 第4章 结论 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-74页 |
| 致谢 | 第74-76页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第76页 |
