| 符号说明 | 第1-8页 |
| 中文摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 引言 | 第12-24页 |
| 1 附红细胞体的概述 | 第12-22页 |
| ·病原学 | 第12-15页 |
| ·附红细胞体流行史 | 第15-17页 |
| ·致病机理 | 第17页 |
| ·目前研究的重要的猪附红细胞体基因 | 第17-18页 |
| ·附红细胞体的诊断 | 第18-21页 |
| ·治疗 | 第21-22页 |
| 2 全基因合成技术 | 第22-24页 |
| 实验一 猪附红细胞体 MSG1 部分基因的全基因合成与原核表达 | 第24-41页 |
| 1 材料与方法 | 第24-33页 |
| ·菌种与质粒 | 第24页 |
| ·酶与生化试剂 | 第24页 |
| ·常用缓冲液及仪器设备 | 第24-25页 |
| ·全基因合成 MSG1-2 | 第25-30页 |
| ·MSG1-2 在大肠杆菌中的表达 | 第30-33页 |
| 2 结果 | 第33-39页 |
| ·密码子的优化及化学合成 | 第33-35页 |
| ·MSG1 基因544-945 位置基因的全基因合成 | 第35-37页 |
| ·目的 DNA 的双酶切鉴定 | 第37页 |
| ·表达载体的构建 | 第37-38页 |
| ·重组质粒在大肠杆菌中表达条件的优化 | 第38-39页 |
| 3 讨论与小结 | 第39-41页 |
| 实验二 猪附红细胞体 MSG1 全基因的合成、克隆、表达及免疫原性分析 | 第41-64页 |
| 1 材料与方法 | 第41-52页 |
| ·菌种与质粒 | 第41页 |
| ·酶与生化试剂 | 第41页 |
| ·实验动物及仪器设备 | 第41-42页 |
| ·常用缓冲液 | 第42页 |
| ·全基因合成 | 第42-46页 |
| ·目的基因在大肠杆菌中的表达 | 第46-48页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第48-49页 |
| ·纯化蛋白的SDS-PAGE 分析 | 第49页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第49-50页 |
| ·检验蛋白的表达（Western blotting） | 第50-51页 |
| ·MSG1 蛋白免疫源性检测 | 第51-52页 |
| 2 结果 | 第52-62页 |
| ·首次PCR | 第52页 |
| ·二次PCR 和酶切鉴定 | 第52-54页 |
| ·克隆质粒的测序结果分析及OE-PCR | 第54-55页 |
| ·表达载体的构建 | 第55页 |
| ·MSG1 基因的分析 | 第55-57页 |
| ·不同诱导时间对蛋白表达量的影响 | 第57-58页 |
| ·不同IPTG 诱导浓度对蛋白浓度的影响 | 第58页 |
| ·包涵体蛋白和融合蛋白的鉴定 | 第58-60页 |
| ·蛋白的纯化及浓度测定 | 第60页 |
| ·Western-Blot 分析 | 第60-61页 |
| ·间接ELISA 结果 | 第61-62页 |
| 3 讨论 | 第62-64页 |
| 结论 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-72页 |
| 附录 | 第72-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录及著作 | 第76页 |
