| 摘要 | 第2-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 符号说明 | 第6-7页 |
| 主要仪器 | 第7-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-27页 |
| 1 鸡胚胎干细胞的研究进展 | 第12-16页 |
| 1.1 胚胎干细胞 | 第12-13页 |
| 1.1.1 胚胎干细胞的生物学特性 | 第12-13页 |
| 1.1.2 胚胎干细胞的研究进展及应用前景 | 第13页 |
| 1.2 鸡的胚胎干细胞 | 第13-16页 |
| 1.2.1 鸡胚胎干细胞的分离方法 | 第14页 |
| 1.2.2 鸡胚胎干细胞的体外培养 | 第14-15页 |
| 1.2.3 VC 对细胞增殖和凋亡的影响 | 第15页 |
| 1.2.4 影响鸡胚胎干细胞传代培养的因素 | 第15-16页 |
| 2 细胞永生化 | 第16-20页 |
| 2.1 细胞永生化的机制 | 第16-17页 |
| 2.2 细胞永生化的方法 | 第17-19页 |
| 2.3 永生化细胞的检测方法 | 第19-20页 |
| 3 端粒及端粒酶在细胞永生化中的应用 | 第20-23页 |
| 3.1 端粒 | 第20页 |
| 3.2 端粒酶 | 第20-23页 |
| 3.2.1 端粒酶的发现 | 第20-21页 |
| 3.2.2 端粒酶的结构及功能 | 第21页 |
| 3.2.3 端粒酶使细胞永生化的机制 | 第21页 |
| 3.2.4 端粒酶在细胞永生化中的优越性 | 第21-22页 |
| 3.2.5 端粒酶使细胞永生化的研究进展 | 第22-23页 |
| 参考文献 | 第23-27页 |
| 第二章 pEGFP-hTERT真核表达载体的构建 | 第27-37页 |
| 1 材料与方法 | 第27-32页 |
| 1.1 试验材料 | 第27-28页 |
| 1.1.1 质粒与细胞 | 第27页 |
| 1.1.2 试验试剂 | 第27-28页 |
| 1.1.3 常用试剂的配制 | 第28页 |
| 1.2 试验方法 | 第28-32页 |
| 1.2.1 pEGFP-hTERT真核表达载体的构建 | 第28-29页 |
| 1.2.2 pEGFP-hTERT重组质粒的大量提取 | 第29页 |
| 1.2.3 鸡胚胎成纤维细胞的分离培养 | 第29-30页 |
| 1.2.4 CEF细胞的冻存与复苏 | 第30-31页 |
| 1.2.5 重组质粒转染鸡胚成纤维细胞 | 第31-32页 |
| 2 试验结果 | 第32-34页 |
| 2.1 CEF细胞的分离培养 | 第32页 |
| 2.2 hTERT基因片段的获得 | 第32-33页 |
| 2.3 真核表达载体pEGFP-hTERT的鉴定 | 第33页 |
| 2.4 重组质粒测序结果 | 第33页 |
| 2.5 真核表达载体pEGFP-hTERT的亚细胞定位 | 第33-34页 |
| 3 讨论 | 第34-35页 |
| 4 结论 | 第35-36页 |
| 参考文献 | 第36-37页 |
| 第三章 维生素C对鸡胚胎干细胞增殖的影响 | 第37-48页 |
| 1 材料方法 | 第38-42页 |
| 1.1 试验材料 | 第38页 |
| 1.2 试验方法 | 第38-42页 |
| 1.2.1 BRL条件培养基的制备 | 第38-39页 |
| 1.2.2 BRL-CM收集时间对CES分离培养效果的影响 | 第39页 |
| 1.2.3 鸡X期胚盘细胞的分离和培养 | 第39-40页 |
| 1.2.4 cESCs的冻存与复苏 | 第40-41页 |
| 1.2.5 CCK-8对cES细胞的最佳检测时间 | 第41页 |
| 1.2.6 CCK-8检测VC对cES细胞的促进增殖作用 | 第41页 |
| 1.2.7 cES细胞增殖曲线绘制 | 第41-42页 |
| 2 试验结果 | 第42-45页 |
| 2.1 大鼠肝细胞的培养传代 | 第42页 |
| 2.2 鸡胚胎干细胞的培养传代 | 第42-43页 |
| 2.3 CCK-8对cES细胞的最佳检测时间 | 第43页 |
| 2.4 不同VC浓度下cES细胞的增殖 | 第43-44页 |
| 2.5 ES细胞增殖曲线绘制 | 第44-45页 |
| 3 讨论 | 第45页 |
| 4 结论 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-48页 |
| 第四章 pEGFP-hTERT转染鸡胚胎干细胞 | 第48-63页 |
| 1 材料与方法 | 第48-55页 |
| 1.1 试验材料 | 第48-49页 |
| 1.1.1 种蛋 | 第48页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第48-49页 |
| 1.2 试验方法 | 第49-55页 |
| 1.2.1 鸡胚胎干细胞分离培养 | 第49页 |
| 1.2.2 鸡胚胎干细胞及单细胞克隆的鉴定 | 第49-50页 |
| 1.2.3 鸡胚胎干细胞的性别鉴定 | 第50-51页 |
| 1.2.4 pEGFP-hTERT转染cESCs条件的优化 | 第51-52页 |
| 1.2.5 新霉素(G418)最佳筛选浓度的确定 | 第52页 |
| 1.2.6 鸡胚胎干细胞RNA的提取 | 第52-53页 |
| 1.2.7 RNA的反转录 | 第53-54页 |
| 1.2.8 RT-PCR检测相关干性基因表达量的变化 | 第54-55页 |
| 1.2.9 cESCs的核型分析 | 第55页 |
| 2 试验结果 | 第55-60页 |
| 2.1 转染pEGFP-hTERT前cESCs的鉴定 | 第55-56页 |
| 2.1.1 cESCs的AKP染色 | 第55-56页 |
| 2.1.2 特异性表面抗原检测 | 第56页 |
| 2.2 鸡胚胎干细胞的性别鉴定 | 第56-57页 |
| 2.3 真核表达载体pEGFP-hTERT转染鸡胚胎干细胞 | 第57页 |
| 2.3.1 重组表达载体pEGFP-hTERT转染cESCs | 第57页 |
| 2.4 培养第2-10代的cESCs | 第57-58页 |
| 2.5 转染pEGFP-hTERT后的cESCs鉴定 | 第58-59页 |
| 2.5.1 AKP染色 | 第58页 |
| 2.5.2 胚胎干细胞表面抗原检测 | 第58-59页 |
| 2.6 cESCs转染重组质粒后相关干性基因的RT-PCR检测 | 第59-60页 |
| 3 讨论 | 第60-61页 |
| 4 结论 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-63页 |
| 全文结论 | 第63-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 硕士期间发表的论文 | 第65-66页 |
