| 摘要 | 第6-8页 |
| abstract | 第8-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-26页 |
| 1.1 雷公藤次生代谢产物研究进展 | 第13-15页 |
| 1.1.1 雷公藤萜类活性物质 | 第13-14页 |
| 1.1.2 雷公藤生物碱活性物质 | 第14-15页 |
| 1.2 雷公藤生物合成途径研究进展 | 第15-19页 |
| 1.2.1 植物体内萜类物质生物合成途径 | 第15-17页 |
| 1.2.2 萜类合成途径关键酶 | 第17-18页 |
| 1.2.3 雷公藤萜类物质生物合成途径研究进展 | 第18-19页 |
| 1.3 雷公藤三萜生物合成途径研究进展 | 第19-24页 |
| 1.3.1 雷公藤三萜合成途径关键酶 | 第20-23页 |
| 1.3.2 雷公藤三萜物质红素研究进展 | 第23-24页 |
| 1.4 选题依据与思路 | 第24-26页 |
| 第二章 基因克隆与序列分析 | 第26-49页 |
| 2.1 材料 | 第26-27页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第26页 |
| 2.1.2 试剂以及仪器 | 第26页 |
| 2.1.3 引物 | 第26-27页 |
| 2.2 试验方法 | 第27-32页 |
| 2.2.1 雷公藤自然根总RNA的提取 | 第27-28页 |
| 2.2.2 cDNA的合成 | 第28页 |
| 2.2.3 基因全长的扩增 | 第28-29页 |
| 2.2.4 PCR产物切胶回收 | 第29-30页 |
| 2.2.5 克隆载体的连接及测序 | 第30-31页 |
| 2.2.6 质粒提取 | 第31页 |
| 2.2.7 生物信息学分析 | 第31-32页 |
| 2.3 结果与分析 | 第32-47页 |
| 2.3.1 雷公藤总RNA提取 | 第32页 |
| 2.3.2 雷公藤鲨烯合酶基因克隆与生物信息学分析 | 第32-37页 |
| 2.3.3 雷公藤鲨烯环氧酶基因克隆与生物信息学分析 | 第37-40页 |
| 2.3.4 雷公藤环氧角鲨烯环化酶基因克隆与生物信息学分析 | 第40-47页 |
| 2.4 小结与讨论 | 第47-49页 |
| 第三章 基因荧光定量表达分析 | 第49-59页 |
| 3.1 材料 | 第49-50页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第49页 |
| 3.1.2 试剂以及仪器 | 第49页 |
| 3.1.3 实时荧光定量PCR引物 | 第49-50页 |
| 3.2 试验方法 | 第50-52页 |
| 3.2.1 总RNA提取 | 第50页 |
| 3.2.2 反转录成cDNA | 第50-51页 |
| 3.2.3 荧光定量PCR反应 | 第51-52页 |
| 3.3 结果与分析 | 第52-56页 |
| 3.3.1 TwSQS基因荧光定量表达分析 | 第52-53页 |
| 3.3.2 TwSE1与TwSE2基因荧光定量表达分析 | 第53-54页 |
| 3.3.3 TwOSC基因荧光定量表达分析 | 第54-56页 |
| 3.4 小结与讨论 | 第56-59页 |
| 第四章 雷公藤鲨烯合酶原核表达 | 第59-69页 |
| 4.1 材料 | 第59-60页 |
| 4.1.1 样品 | 第59页 |
| 4.1.2 试剂以及仪器 | 第59页 |
| 4.1.3 主要培养基及溶液配制方法 | 第59-60页 |
| 4.1.4 连接pET30a(+)载体引物 | 第60页 |
| 4.2 试验方法 | 第60-64页 |
| 4.2.1 雷公藤C-末端截短TwSQS基因的扩增、连接、转化 | 第60页 |
| 4.2.2 C-末端截短TwSQS单克隆质粒和pET30a(+)质粒的双酶切 | 第60-61页 |
| 4.2.3 雷公藤C-末端截短TwSQS原核表达载体的构建与鉴定 | 第61-62页 |
| 4.2.4 原核表达 | 第62页 |
| 4.2.5 粗蛋白提取液制备 | 第62页 |
| 4.2.6 聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第62页 |
| 4.2.7 Western-Blot检测 | 第62-63页 |
| 4.2.8 蛋白纯化 | 第63页 |
| 4.2.9 蛋白透析 | 第63页 |
| 4.2.10 雷公藤鲨烯合酶活性检测 | 第63-64页 |
| 4.3 结果与分析 | 第64-67页 |
| 4.3.1 C-末端截短TwSQS基因的PCR扩增 | 第64页 |
| 4.3.2 原核表达载体构建和重组质粒的鉴定 | 第64-65页 |
| 4.3.3 TwSQS蛋白SDS-PAGE和Western-Blot检测 | 第65页 |
| 4.3.4 TwSQS蛋白催化活性GC-MS检测 | 第65-67页 |
| 4.4 小结与讨论 | 第67-69页 |
| 第五章 雷公藤红素液相检测 | 第69-76页 |
| 5.1 材料 | 第69页 |
| 5.1.1 植物材料 | 第69页 |
| 5.1.2 试剂以及仪器 | 第69页 |
| 5.2 试验方法 | 第69-70页 |
| 5.2.1 雷公藤不同组织、发状根次生代谢物的分离提取 | 第69页 |
| 5.2.2 雷公藤发状根MS培养基次生代谢物的分离提取 | 第69页 |
| 5.2.3 雷公藤红素标准曲线的获得 | 第69-70页 |
| 5.2.4 高效液相色谱检测雷公藤红素含量 | 第70页 |
| 5.3 结果与分析 | 第70-74页 |
| 5.3.1 雷公藤红素标准曲线及色谱图 | 第70-72页 |
| 5.3.2 雷公藤不同组织中红素含量 | 第72页 |
| 5.3.3 雷公藤发状根红素含量 | 第72-73页 |
| 5.3.4 雷公藤发状根MS培养基红素含量 | 第73-74页 |
| 5.3.5 雷公藤发状根红素总含量变化分析 | 第74页 |
| 5.4 小结与讨论 | 第74-76页 |
| 第六章 结论与讨论 | 第76-79页 |
| 6.1 论文创新点 | 第76页 |
| 6.2 主要结论 | 第76页 |
| 6.3 讨论 | 第76-78页 |
| 6.4 下一步研究工作 | 第78-79页 |
| 参考文献 | 第79-87页 |
| 附录 | 第87-97页 |
| 缩略词 | 第97-98页 |
| 致谢 | 第98-99页 |
| 作者简介 | 第99页 |
