| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-20页 |
| 1.1 角蛋白研究现状 | 第11-13页 |
| 1.1.1 角蛋白概述 | 第11页 |
| 1.1.2 羽毛角蛋白的应用 | 第11-12页 |
| 1.1.3 羽毛角蛋白的加工处理方法 | 第12-13页 |
| 1.2 降解角蛋白的微生物 | 第13-14页 |
| 1.2.1 真菌 | 第13页 |
| 1.2.2 放线菌 | 第13-14页 |
| 1.2.3 细菌 | 第14页 |
| 1.3 羽毛角蛋白降解机理 | 第14-17页 |
| 1.3.1 物理压力理论 | 第14-15页 |
| 1.3.2 二硫键还原理论 | 第15-17页 |
| 1.3.3 细胞氧化还原理论 | 第17页 |
| 1.4 羽毛降解菌中关键酶的分离纯化及基因克隆 | 第17-18页 |
| 1.5 研究的目的和意义 | 第18-20页 |
| 第二章 高效羽毛降解菌株的鉴定 | 第20-27页 |
| 2.1 材料 | 第20-21页 |
| 2.1.1 菌种来源 | 第20页 |
| 2.1.2 羽毛和羽毛粉的制备 | 第20页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第20页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第20-21页 |
| 2.1.5 培养基 | 第21页 |
| 2.2 方法 | 第21-23页 |
| 2.2.1 羽毛降解菌株的形态学及生理生化鉴定 | 第21页 |
| 2.2.2 基因组总DNA提取 | 第21页 |
| 2.2.3 16S rDNA扩增 | 第21页 |
| 2.2.4 PCR产物的纯化 | 第21-22页 |
| 2.2.5 扩增片段的T载体克隆 | 第22-23页 |
| 2.2.6 系统进化树分析 | 第23页 |
| 2.2.7 不同动物来源毛发的水解效果研究 | 第23页 |
| 2.3 结果 | 第23-26页 |
| 2.3.1 菌株形态学及生理生化鉴定 | 第23-24页 |
| 2.3.2 16S rDNA序列分析 | 第24-25页 |
| 2.3.3 不同角蛋白发酵底物的可溶性蛋白含量变化 | 第25-26页 |
| 2.4 讨论 | 第26-27页 |
| 第三章 Bacillus subtilis 8的角蛋白降解机制研究 | 第27-36页 |
| 3.1 材料 | 第27-28页 |
| 3.1.1 实验菌株 | 第27页 |
| 3.1.2 主要试剂及其配制 | 第27页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第27-28页 |
| 3.2 实验方法 | 第28-31页 |
| 3.2.1 蛋白酶活及羽毛降解效率的测定 | 第28-29页 |
| 3.2.2 发酵液中硫酸盐含量的检测 | 第29页 |
| 3.2.3 亚硫酸盐浓度的测定 | 第29-30页 |
| 3.2.4 巯基化合物含量的测定 | 第30-31页 |
| 3.2.5 发酵产物中氨基酸含量测定 | 第31页 |
| 3.3 结果分析 | 第31-34页 |
| 3.3.1 羽毛降解效率 | 第31-32页 |
| 3.3.2 扫描电镜下观察羽毛的降解过程 | 第32-33页 |
| 3.3.3 发酵液中氨基酸及含硫化合物含量变化 | 第33-34页 |
| 3.4 讨论 | 第34-36页 |
| 第四章 Bacillus subtilis 8羽毛降解过程中关键酶的分离纯化 | 第36-43页 |
| 4.1 材料 | 第36-37页 |
| 4.1.1 实验菌株 | 第36页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第36页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第36-37页 |
| 4.2 实验方法 | 第37-38页 |
| 4.2.1 粗酶液的制备 | 第37页 |
| 4.2.2 硫酸铵分级沉淀 | 第37页 |
| 4.2.3 蛋白酶样品的制备 | 第37页 |
| 4.2.4 DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析 | 第37-38页 |
| 4.2.5 LC-MS/MS分析 | 第38页 |
| 4.3 结果与分析 | 第38-41页 |
| 4.3.1 硫酸铵分级沉淀 | 第38页 |
| 4.3.2 阴离子交换层析和明胶活性染色 | 第38-39页 |
| 4.3.3 纯化效果评价 | 第39-40页 |
| 4.3.4 蛋白酶LC-MS/MS鉴定 | 第40-41页 |
| 4.4 讨论 | 第41-43页 |
| 第五章 Bacillus subtilis 8胞外蛋白酶的基因克隆与原核表达 | 第43-58页 |
| 5.1 材料 | 第43-44页 |
| 5.1.1 菌株及载体 | 第43页 |
| 5.1.2 试剂和工具酶 | 第43页 |
| 5.1.3 培养基 | 第43-44页 |
| 5.1.4 引物序列 | 第44页 |
| 5.2 方法 | 第44-48页 |
| 5.2.1 Bacillus subtilis 8所分泌的胞外蛋白酶基因的扩增 | 第44-45页 |
| 5.2.2 蛋白酶基因的高保真扩增 | 第45-46页 |
| 5.2.3 表达载体的线性化 | 第46页 |
| 5.2.4 重组连接 | 第46-47页 |
| 5.2.5 重组表达载体的转化 | 第47-48页 |
| 5.2.6 重组表达载体的诱导及酶活测定 | 第48页 |
| 5.2.7 各重组蛋白酶对羽毛角蛋白的水解效果研究 | 第48页 |
| 5.3 结果分析 | 第48-56页 |
| 5.3.1 蛋白酶基因的扩增 | 第48-49页 |
| 5.3.2 Bacillus subtilis 8蛋白酶基因的原核表达 | 第49-53页 |
| 5.3.3 各重组蛋白酶的活性测定 | 第53-54页 |
| 5.3.4 不同重组蛋白酶组合对羽毛的水解效果 | 第54-56页 |
| 5.4 讨论 | 第56-58页 |
| 全文结论 | 第58页 |
| 创新点 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-63页 |
| 致谢 | 第63页 |
