英文缩写 | 第4-5页 |
中文摘要 | 第5-6页 |
Abstract | 第6-7页 |
前言 | 第8-14页 |
1. 细胞色素酶系P450简介 | 第8-9页 |
2. CYP3A亚家族简介 | 第9页 |
3. CYP3A4的功能和重要性 | 第9-10页 |
4. CYP3A4基因的表达调控 | 第10-14页 |
材料与方法 | 第14-29页 |
1. 材料与试剂 | 第14-17页 |
2. 实验仪器 | 第17页 |
3. 实验方法 | 第17-29页 |
3.1 软件预测作用于CYP3A4基因3'-UTR的miRNA | 第17页 |
3.2 构建miRNA表达载体p113.7和荧光素酶报告基因表达载体psiCHECK-Ⅱ | 第17-19页 |
3.3 细胞培养 | 第19页 |
3.4 脂质体介导质粒转染细胞 | 第19-20页 |
3.5 双荧光素酶活性检测 | 第20页 |
3.6 Trizol法抽提肝脏组织总RNA | 第20-21页 |
3.7 反转录mRNA | 第21-22页 |
3.8 CYP3A4的mRNA实时荧光定量PCR" | 第22-23页 |
3.9 miRNA的实时荧光定量PCR, | 第23-24页 |
3.10 肝脏组织的总蛋白抽提和浓度测定 | 第24-25页 |
3.11 Western Blot | 第25-27页 |
3.12 钙沉淀法抽提肝脏组织微粒体 | 第27页 |
3.13 高效液相色谱HPLC测定CYP3A4酶活性 | 第27-28页 |
3.14 数据分析 | 第28-29页 |
结果 | 第29-43页 |
1. 软件预测作用于CYP3A4基因3’-UTR的miRNA | 第29-30页 |
2. 高通量双萤光素酶报告实验筛选miRNA | 第30-31页 |
3. miRNA-660的双荧光素酶报告验证实验 | 第31-33页 |
4. miRNA-660和miRNA-27b在肝脏组织中表达量检测 | 第33-35页 |
5. 肝脏组织中CYP3A4mRNA水平及与miRNA-660、miRNA-27b相关性分析 | 第35-38页 |
6. 肝脏组织中CYP3A4蛋白水平及与miRNA-660、miRNA-27b相关性分析 | 第38-40页 |
7. 肝脏组织中CYP3A4酶活性及与miRNA-660、miRNA-27b相关性分析 | 第40-43页 |
讨论 | 第43-45页 |
参考文献 | 第45-49页 |
致谢 | 第49-50页 |