| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| List of abbreviations | 第15-17页 |
| 1 Introduction | 第17-43页 |
| 1.1 Animal prion diseases | 第17-20页 |
| 1.1.1 Scrapie | 第17-18页 |
| 1.1.2 Bovine spongiform encephalopathy | 第18页 |
| 1.1.3 Chronic wasting disease | 第18-19页 |
| 1.1.4 Transmissible mink encephalopathy | 第19页 |
| 1.1.5 Feline and other animal prion diseases | 第19-20页 |
| 1.2 Human prion diseases | 第20-24页 |
| 1.2.1 Sporadic prion disease | 第20页 |
| 1.2.2 Inherited prion disease | 第20-21页 |
| 1.2.3 Acquired prion disease | 第21-24页 |
| 1.3 The infective agent "Prion" and its propagation | 第24-28页 |
| 1.3.1 The Prion strains | 第26-27页 |
| 1.3.2 Characteristics of "Prion" | 第27页 |
| 1.3.3 Pathogenic mechanism | 第27-28页 |
| 1.4 Similarity of Prions with other neurodegenerative diseases | 第28-29页 |
| 1.5 Cellular quality control mechanisms | 第29-34页 |
| 1.5.1 Ubiquitin-proteasomal pathway | 第29-32页 |
| 1.5.2 Autophgy-lysosomal Pathway | 第32-34页 |
| 1.6 Parkin | 第34-42页 |
| 1.6.1 Parkin and misfolded proteins | 第35-38页 |
| 1.6.2 Parkin and mitophagy | 第38-40页 |
| 1.6.3 Parkin and neurodegenerative diseases | 第40页 |
| 1.6.4 Parkin as neuroprotective agent against diverse range of toxic insults | 第40-42页 |
| 1.7 Aims and Objectives | 第42-43页 |
| 2 Materials and Methods (General) | 第43-51页 |
| 2.1 Cell line and Cell culture | 第43-44页 |
| 2.1.1 Propagation of cell lines | 第43-44页 |
| 2.2 PrP106-126 preperation and cells treatment | 第44页 |
| 2.3 Methods for the detection of proteins | 第44-46页 |
| 2.3.1 Western blot analysis | 第44-46页 |
| 2.4 Cell biology | 第46-47页 |
| 2.4.1 Annexin V assay,measurement of apoptotic and dead cells | 第46页 |
| 2.4.2 Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay | 第46-47页 |
| 2.5 Immunocytochemistry and confocal microscopy | 第47-48页 |
| 2.5.1 Preparation of coverslips | 第47页 |
| 2.5.2 Cell growth and treatment with FITC-tagged PrP106-126 | 第47页 |
| 2.5.3 Fixation and Blocking | 第47页 |
| 2.5.4 Incubation with antibodies | 第47-48页 |
| 2.5.5 Counter staining and Mounting | 第48页 |
| 2.5.6 Confocal microscope imaging | 第48页 |
| 2.6 Transfection of Cells | 第48-49页 |
| 2.6.1 Transfection optimization for N2a cells | 第48页 |
| 2.6.2 Complexes preparation | 第48页 |
| 2.6.3 Cells Transfection and treatment | 第48-49页 |
| 2.7 Preparation of cytosolic and mitochondrial fractions | 第49页 |
| 2.8 Reagents Used | 第49-50页 |
| 2.9 Statistical analysis | 第50-51页 |
| 3. Results | 第51-78页 |
| Part Ⅰ:Slacken Parkin Solubilty and its Co-localization with PrP106-126 | 第51-59页 |
| 1 Introduction | 第51-52页 |
| 2 Materials and methods | 第52-53页 |
| 2.1 PrP106-126 peptide and cell culture treatment | 第52页 |
| 2.2 Cells harvesting and western blot analysis | 第52页 |
| 2.3 Immunocytochemistry and confocal microscopy | 第52-53页 |
| 3 Results | 第53-57页 |
| 3.1 The effect of prion peptides on soluble Parkin Level | 第53-55页 |
| 3.2 Parkin colocalizes with intracellular FITC-PrP106-126 in N2a cells | 第55-57页 |
| 4 Discussion | 第57-58页 |
| 5 Conclusion | 第58-59页 |
| Part Ⅱ:Parkin Expression Alleviates PrP106-126 Induced Toxicity and Enhances CellSurvival | 第59-69页 |
| 1 Introduction | 第59-60页 |
| 2 Materials and methods | 第60-61页 |
| 2.1 Transfection optimization for N2a cells | 第60页 |
| 2.2 Cells Transfection and treatment | 第60-61页 |
| 2.3 Annexin V assay for the measurement of apoptotic and dead cells | 第61页 |
| 2.4 Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay | 第61页 |
| 3 Results | 第61-67页 |
| 3.1 Minimization of Transfection-related neurotoxicity | 第61-65页 |
| 3.2 Parkin overexpression enhances cells survival | 第65页 |
| 3.3 Parkin overexpression alleviates neuronal apoptosis induced by PrP106-126 | 第65-67页 |
| 4 Discussion | 第67-68页 |
| 5 Conclusion | 第68-69页 |
| Part Ⅲ:Parkin overexpression allivates PrP106-126 induced cytotoxicity via enhanced autophagy in N2a cells | 第69-78页 |
| 1 Introduction | 第69-70页 |
| 2 Materials and methods | 第70-71页 |
| 2.1 Cells Transfection and treatments | 第70页 |
| 2.2 Preparation of cytosolic and mitochondrial fractions | 第70-71页 |
| 2.3 Western blot analysis of cytosolic and mitochondrial fractions | 第71页 |
| 3 Results | 第71-75页 |
| 3.1 Parkin overexpression promotes autophagy in PrP106-126-treated N2a cells | 第71-73页 |
| 3.2 Parkin overexpression disrupts the mitochondrial apoptotic pathway in PrP106-126-treated N2a cells | 第73-75页 |
| 4 Discussion | 第75-77页 |
| 5 Conclusion | 第77-78页 |
| 4. GENERAL CONCLUSION | 第78-79页 |
| Innovation | 第79-80页 |
| References | 第80-99页 |
| Acknowledgement | 第99-101页 |
| Author CV | 第101-102页 |
