| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 缩略词对照表 | 第7-12页 |
| 第一章 前言 | 第12-22页 |
| 1 线粒体介绍 | 第12-14页 |
| 1.1 线粒体的发现历史 | 第12页 |
| 1.2 线粒体基因结构 | 第12-13页 |
| 1.3 线粒体生理功能及相关研究 | 第13-14页 |
| 2. 线粒体基因与能量代谢 | 第14-17页 |
| 2.1 线粒体氧化呼吸链 | 第14-16页 |
| 2.2. 线粒体功能与肿瘤 | 第16页 |
| 2.3 线粒体基因ND1、ND3的结构与功能 | 第16-17页 |
| 3. | 第17-18页 |
| 3.1 结直肠癌研究现状 | 第17页 |
| 3.2 结直肠癌检测方法 | 第17-18页 |
| 3.3 结直肠癌发病相关基因 | 第18页 |
| 4. RNAi干扰技术及BrdU标记方法 | 第18-21页 |
| 4.1 RNAi的作用机制 | 第18-20页 |
| 4.2 BrdU掺入标记 | 第20-21页 |
| 5. 研究的目的及意义 | 第21-22页 |
| 第二章. 材料与方法 | 第22-41页 |
| 1 实验材料 | 第22-25页 |
| 1.1 细胞株 | 第22-23页 |
| 1.2 主要试剂耗材 | 第23-24页 |
| 1.3 主要仪器 | 第24-25页 |
| 2. 组织水平检测实验方法 | 第25-32页 |
| 2.1 结直肠癌病理组织水平ND1、ND3基因差异性检测实验 | 第25-26页 |
| 2.2 荧光定量PCR检测病理组织中MT-ND1、MT-ND3表达情况 | 第26-28页 |
| 2.3 Western Blot检测组织水平中ND1、ND3表达差异 | 第28-32页 |
| 3 细胞水平检测实验方法 | 第32-35页 |
| 3.1 细胞培养 | 第32-33页 |
| 3.2 细胞铺板 | 第33页 |
| 3.3 PCR扩增mtND1、mtND3的全长目的基因序列 | 第33-34页 |
| 3.4 实时荧光定量PCR检测6株细胞ND1、ND3表达情况 | 第34-35页 |
| 3.5 Western Blot检测六株细胞中ND1、ND3的蛋白表达量 | 第35页 |
| 4. HT29、HCT116细胞株ND1/ND3干扰下调后相关项目检测实验 | 第35-41页 |
| 4.1 HT29、HCT116细胞株SiND1/SiND3干扰片段筛选实验 | 第36-37页 |
| 4.2 转染效率检测 | 第37页 |
| 4.3 RT-PCR检测并筛选干扰片段干扰效率 | 第37页 |
| 4.4 Weasten Bolt检测干扰并筛选干扰片段效率 | 第37-38页 |
| 4.5 ND1 ND3基因下调对HT29、HCT116细胞增殖活性的影响 | 第38页 |
| 4.6 流式检测细胞周期 | 第38-39页 |
| 4.7 BrdU掺入联合PI染色监测细胞增殖周期 | 第39页 |
| 4.8 细胞ATP检测实验 | 第39-40页 |
| 4.9 ROS检测 | 第40页 |
| 4.10 线粒体复合物Ⅰ活性检测 | 第40-41页 |
| 第三章. 结果与分析 | 第41-65页 |
| 1. 结直肠癌病理组织ND1、ND3基因差异检测结果 | 第41-44页 |
| 1.1 CRC病理组织中ND1、ND3全长片段PCR对比结果 | 第42页 |
| 1.2 CRC病理组织中ND1、ND3定量Q-PCR检测结果 | 第42-43页 |
| 1.3 CRC病理组织中ND1、ND3蛋白表达量检测结果 | 第43-44页 |
| 2. 结直肠癌细胞株差异性检测结果 | 第44-46页 |
| 2.1 结直肠癌细胞株基因组ND1、ND3全长片段PCR对比结果 | 第44页 |
| 2.2 结直肠癌细胞株ND1、ND3定量qRT-PCR检测结果 | 第44-45页 |
| 2.3 结直肠癌细胞ND1、ND3蛋白表达量检测结果 | 第45-46页 |
| 3. HT29、HCT116细胞株ND1、ND3 SiRNA干扰筛选结果 | 第46-51页 |
| 3.1 SiRNA转染结果 | 第47-49页 |
| 3.2 干扰效率检测 | 第49-51页 |
| 4. 下调ND1基因和ND3基因后细胞水平相关检测结果 | 第51-65页 |
| 4.1 下调ND1后HT29、HCT116细胞增殖活力检测结果 | 第52页 |
| 4.2 下调ND3后HT29、HCT116细胞增殖活力检测结果 | 第52-53页 |
| 4.3 细胞周期检测结果 | 第53-56页 |
| 4.4 下调ND1、ND3后BRDU&PI双染监测细胞增殖周期结果 | 第56-60页 |
| 4.5 下调ND1、ND3后细胞ATP含量变化检测结果 | 第60-61页 |
| 4.6 下调ND1、ND3后细胞ROS含量变化检测结果 | 第61-62页 |
| 4.7 下调ND1、ND3后细胞线粒体复合物Ⅰ活性变化检测结果 | 第62-64页 |
| 4.8 下调ND1、ND3基因后对细胞能量代谢相关蛋白表达的影响 | 第64-65页 |
| 第四章. 讨论 | 第65-67页 |
| 1. 线粒体基因差异表达 | 第65页 |
| 2. 线粒体基因ND1和ND3与细胞增殖的关系 | 第65-66页 |
| 3. BrdU联合P1分析细胞增殖速率 | 第66-67页 |
| 第五章. 结论 | 第67-68页 |
| 附录一 相关试剂配制方法 | 第68-70页 |
| 附录二 SiRNA序列 | 第70-72页 |
| 参考文献 | 第72-80页 |
| 硕士期间科研成果及参与项目情况 | 第80-82页 |
| 致谢 | 第82页 |
