| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第1章 绪论 | 第13-23页 |
| 1.1 GAS引起感染相关的毒力因子 | 第13-17页 |
| 1.1.1 M蛋白 | 第14页 |
| 1.1.2 链球菌致热外毒素B | 第14-15页 |
| 1.1.3 GAPDH | 第15-16页 |
| 1.1.4 NADase | 第16页 |
| 1.1.5 CovRS双组份系统 | 第16-17页 |
| 1.2 化脓性链球菌溶血素O | 第17-21页 |
| 1.2.1 SLO基因与表达 | 第18页 |
| 1.2.2 SLO的蛋白结构 | 第18-20页 |
| 1.2.3 溶血素介导的转位作用(Cytolysin-mediated translocation,CMT) | 第20-21页 |
| 1.3 研究内容和意义 | 第21-22页 |
| 1.4 技术路线 | 第22-23页 |
| 第2章 SLO重组蛋白及其多克隆抗体的制备 | 第23-32页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-25页 |
| 2.1.1 试剂与仪器 | 第23-24页 |
| 2.1.2 培养基与溶液 | 第24-25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-28页 |
| 2.2.1 重组SLO表达载体的构建 | 第25-26页 |
| 2.2.1.1 目的基因的PCR | 第25页 |
| 2.2.1.2 重组质粒的连接与转化 | 第25-26页 |
| 2.2.2 重组SLO的诱导表达 | 第26页 |
| 2.2.3 重组蛋白的纯化 | 第26页 |
| 2.2.4 动物免疫与多克隆抗体血清制备 | 第26-27页 |
| 2.2.5 抗体效价分析 | 第27页 |
| 2.2.6 Western Blot分析多克隆抗体 | 第27-28页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第28-31页 |
| 2.3.1 SLO表达载体的构建与表达 | 第28-29页 |
| 2.3.2 SLO重组蛋白纯化与溶血活性分析 | 第29-30页 |
| 2.3.3 抗体的制备和Elisa评价多克隆抗体效价 | 第30页 |
| 2.3.4 多克隆抗体的Western Blot鉴定 | 第30-31页 |
| 2.4 本章小结 | 第31-32页 |
| 第3章 化脓性链球菌溶血素O基因突变株的构建 | 第32-47页 |
| 3.1 实验材料 | 第32-34页 |
| 3.1.1 菌种、质粒和蛋白 | 第32页 |
| 3.1.2 实验试剂与仪器 | 第32-33页 |
| 3.1.3 培养基与溶液 | 第33-34页 |
| 3.2 实验方法 | 第34-40页 |
| 3.2.1 DNA的提取与目标基因的PCR | 第34-37页 |
| 3.2.2 重组质粒的构建 | 第37-39页 |
| 3.2.3 化脓性链球菌突变株的构建 | 第39页 |
| 3.2.4 突变株的验证 | 第39-40页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第40-46页 |
| 3.3.1 重组敲出质粒的鉴定 | 第40-43页 |
| 3.3.2 突变株的染色体slo基因PCR鉴定 | 第43-44页 |
| 3.3.3 突变株的SLO蛋白缺失验证 | 第44-46页 |
| 3.4 本章小结 | 第46-47页 |
| 第4章 SLO基因突变对GAS毒力的影响 | 第47-58页 |
| 4.1 实验材料 | 第47-49页 |
| 4.1.1 实验菌株菌种 | 第47页 |
| 4.1.2 实验试剂与仪器 | 第47-48页 |
| 4.1.3 培养基与试剂 | 第48-49页 |
| 4.2 实验方法 | 第49-51页 |
| 4.2.1 slo基因突变对GAS生长的影响 | 第49页 |
| 4.2.2 NADase的活性测定 | 第49页 |
| 4.2.3 GAPDH活性测定 | 第49页 |
| 4.2.4 slo基因突变对链球菌致热外毒素B的影响 | 第49-50页 |
| 4.2.5 slo基因突变对GAS毒力的影响 | 第50-51页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第51-56页 |
| 4.3.1 slo基因突变对GAS生长的影响 | 第51页 |
| 4.3.2 slo基因突变对NADase活性影响 | 第51-52页 |
| 4.3.3 slo基因突变对细胞表面GAPDH活性影响 | 第52页 |
| 4.3.4 slo基因突变对对SpeB的影响 | 第52-54页 |
| 4.3.5 slo基因突变对GAS对细胞的粘附的影响 | 第54-56页 |
| 4.3.6 slo基因突变对化脓性链球菌改变宿主细胞通透性能力的影响 | 第56页 |
| 4.5 本章小结 | 第56-58页 |
| 结论 | 第58-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-70页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文及科研成果 | 第70页 |
