摘要 | 第4-6页 |
Abstract | 第6-7页 |
1 前言 | 第10-15页 |
2 实验材料与方法 | 第15-34页 |
2.1 实验质粒与细胞 | 第15页 |
2.2 实验试剂与相关溶液配制 | 第15-22页 |
2.2.1 细胞培养相关试剂及溶液配制 | 第15-16页 |
2.2.2 慢病毒包装相关试剂及溶液配制 | 第16-17页 |
2.2.3 转染相关试剂及溶液配制 | 第17页 |
2.2.4 质粒提取试剂及溶液配制 | 第17-18页 |
2.2.5 细胞RNA提取及RT-PCR试剂及相关溶液配制 | 第18-19页 |
2.2.6 Western Blotting法试剂及相关溶液配制 | 第19-21页 |
2.2.7 MTT法试剂及相关溶液配制 | 第21页 |
2.2.8 TUNEL实验试剂及相关溶液配制 | 第21-22页 |
2.2.9 抗癌药顺铂溶液配制 | 第22页 |
2.3 实验仪器与设备 | 第22-23页 |
2.4 试验方法 | 第23-34页 |
2.4.1 转化 | 第23-24页 |
2.4.2 小提质粒 | 第24页 |
2.4.3 中提质粒 | 第24-25页 |
2.4.4 细胞培养 | 第25页 |
2.4.5 慢病毒包装及稳转细胞株的筛选 | 第25-26页 |
2.4.6 实时定量RT-PCR(qRT-PCR) | 第26-28页 |
2.4.7 Western Blotting | 第28-30页 |
2.4.8 MTT Assay | 第30-31页 |
2.4.9 TUNEL | 第31页 |
2.4.10 PEI转染 | 第31-32页 |
2.4.11 荧光素酶测定Luciferase Assay | 第32-33页 |
2.4.12 数据分析 | 第33-34页 |
3 实验结果 | 第34-39页 |
3.1 慢病毒包装 | 第34页 |
3.2 稳定细胞株筛选成功 | 第34-35页 |
3.3 Nrf1过表达降低MCF-7 对顺铂的敏感性,敲降Nrf1可以增加MCF-7 对顺铂的药物敏感性,促进细胞死亡。 | 第35页 |
3.4 抗癌药顺铂能诱导Nrf1蛋白的表达 | 第35-36页 |
3.5 Nrf1过表达能抑制顺铂诱导的细胞凋亡 | 第36-37页 |
3.6 Nrf1在转录水平上上调Bcl-2 的表达,下调Caspase-3 的表达 | 第37页 |
3.7 Nrf1在蛋白质水平上上调Bcl-2 的表达,下调Caspase-3 的表达 | 第37-38页 |
3.8 Nrf1与Bcl-2 启动子上的ARE作用激活Bcl-2 的转录 | 第38-39页 |
4 讨论 | 第39-42页 |
5 结论与展望 | 第42-43页 |
致谢 | 第43-44页 |
参考文献 | 第44-47页 |
文献综述 Nrf1功能研究进展 | 第47-55页 |
一、Nrf1在细胞应对氧化应激过程中发挥的作用 | 第47-48页 |
二、Nrf1与有氧运动能力有关 | 第48页 |
三、Nrf1对心力衰竭的影响 | 第48-49页 |
四、Nrf1调控蛋白酶体恢复途径 | 第49页 |
五、Nrf1参与炎症反应 | 第49-50页 |
六、Nrf1对发育的影响 | 第50-51页 |
参考文献 | 第51-55页 |
附录1 攻读硕士学位期间发表的论文 | 第55-56页 |
附录2 攻读硕士学位期间参加的科研项目 | 第56页 |