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过表达Tcfec对造血干细胞的影响研究

摘要第3-5页
ABSTRACT第5-6页
缩略词表第9-10页
第1章 引言第10-12页
第2章 材料与方法第12-28页
    2.1 实验细胞、试剂与设备第12-14页
        2.1.1 实验细胞第12页
        2.1.2 主要的实验试剂第12-13页
        2.1.3 主要的实验设备第13-14页
        2.1.4 主要的试剂配制第14页
    2.2 实验方法第14-28页
        2.2.1 RNA-Seq测序第14-15页
        2.2.2 病毒包装细胞的培养第15-16页
        2.2.3 构建pMYs-Tcfec-IRES-GFP重组质粒第16-19页
        2.2.4 逆转录病毒的包装第19-20页
        2.2.5 胎肝Lin-细胞富集第20-21页
        2.2.6 胎肝Lin-细胞的感染第21页
        2.2.7 小鼠移植辐照的处理第21页
        2.2.8 Lin-细胞感染率检测和GFP+细胞分选/移植第21-22页
        2.2.9 q-PCR验证Tcfec过表达第22-24页
        2.2.10 细胞免疫表型和细胞周期分析第24-26页
        2.2.11 骨髓细胞与基质细胞共培养实验第26-27页
        2.2.12 克隆形成实验(Colony forming units, CFU)第27页
        2.2.13 统计分析第27-28页
第3章 实验结果第28-40页
    3.1 证实TCFEC特异性高表达于HSC第28-30页
        3.1.1 分选高纯度HSC、MPP细胞第28页
        3.1.2 分选样品质量检测第28-29页
        3.1.3 RNA-seq测序结果质控第29-30页
        3.1.4 RNA-Seq解析Tcfec在HSC/MPP表达水平第30页
    3.2 构建过表达TCFEC分子克隆载体第30-31页
        3.2.1 设计Tcfec过表达载体引物第30-31页
        3.2.2 构建Tcfec过表达重组质粒第31页
    3.3 细胞学水平验证PMYS-TCFEC-IRES-GFP构建成功第31-32页
    3.4 TCFEC功能研究实验结果第32-40页
        3.4.1 过表达Tcfec提高HSC的植入率第32-33页
        3.4.2 过表达Tcfec的HSC库增加且造血功能正常第33-36页
        3.4.3 过表达Tcfec的HSC自我更新能力正常第36-38页
        3.4.4 Tcfec依赖HSC自身作用方式发挥功能第38-40页
第4章 讨论第40-42页
    4.1 转录因子TCFEC与HSC植入第40-41页
    4.2 转录因子TCFEC与造血干细胞功能调控第41-42页
第5章 结论与展望第42-43页
    5.1 结论第42页
    5.2 进一步工作的方向第42-43页
致谢第43-44页
参考文献第44-47页
攻读学位期间的研究成果第47-48页
综述第48-52页
    参考文献第51-52页

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