摘要 | 第3-5页 |
ABSTRACT | 第5-6页 |
缩略词表 | 第9-10页 |
第1章 引言 | 第10-12页 |
第2章 材料与方法 | 第12-28页 |
2.1 实验细胞、试剂与设备 | 第12-14页 |
2.1.1 实验细胞 | 第12页 |
2.1.2 主要的实验试剂 | 第12-13页 |
2.1.3 主要的实验设备 | 第13-14页 |
2.1.4 主要的试剂配制 | 第14页 |
2.2 实验方法 | 第14-28页 |
2.2.1 RNA-Seq测序 | 第14-15页 |
2.2.2 病毒包装细胞的培养 | 第15-16页 |
2.2.3 构建pMYs-Tcfec-IRES-GFP重组质粒 | 第16-19页 |
2.2.4 逆转录病毒的包装 | 第19-20页 |
2.2.5 胎肝Lin-细胞富集 | 第20-21页 |
2.2.6 胎肝Lin-细胞的感染 | 第21页 |
2.2.7 小鼠移植辐照的处理 | 第21页 |
2.2.8 Lin-细胞感染率检测和GFP+细胞分选/移植 | 第21-22页 |
2.2.9 q-PCR验证Tcfec过表达 | 第22-24页 |
2.2.10 细胞免疫表型和细胞周期分析 | 第24-26页 |
2.2.11 骨髓细胞与基质细胞共培养实验 | 第26-27页 |
2.2.12 克隆形成实验(Colony forming units, CFU) | 第27页 |
2.2.13 统计分析 | 第27-28页 |
第3章 实验结果 | 第28-40页 |
3.1 证实TCFEC特异性高表达于HSC | 第28-30页 |
3.1.1 分选高纯度HSC、MPP细胞 | 第28页 |
3.1.2 分选样品质量检测 | 第28-29页 |
3.1.3 RNA-seq测序结果质控 | 第29-30页 |
3.1.4 RNA-Seq解析Tcfec在HSC/MPP表达水平 | 第30页 |
3.2 构建过表达TCFEC分子克隆载体 | 第30-31页 |
3.2.1 设计Tcfec过表达载体引物 | 第30-31页 |
3.2.2 构建Tcfec过表达重组质粒 | 第31页 |
3.3 细胞学水平验证PMYS-TCFEC-IRES-GFP构建成功 | 第31-32页 |
3.4 TCFEC功能研究实验结果 | 第32-40页 |
3.4.1 过表达Tcfec提高HSC的植入率 | 第32-33页 |
3.4.2 过表达Tcfec的HSC库增加且造血功能正常 | 第33-36页 |
3.4.3 过表达Tcfec的HSC自我更新能力正常 | 第36-38页 |
3.4.4 Tcfec依赖HSC自身作用方式发挥功能 | 第38-40页 |
第4章 讨论 | 第40-42页 |
4.1 转录因子TCFEC与HSC植入 | 第40-41页 |
4.2 转录因子TCFEC与造血干细胞功能调控 | 第41-42页 |
第5章 结论与展望 | 第42-43页 |
5.1 结论 | 第42页 |
5.2 进一步工作的方向 | 第42-43页 |
致谢 | 第43-44页 |
参考文献 | 第44-47页 |
攻读学位期间的研究成果 | 第47-48页 |
综述 | 第48-52页 |
参考文献 | 第51-52页 |