| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第1章 绪论 | 第11-25页 |
| 1.1 果蝇的介绍 | 第11-12页 |
| 1.1.1 果蝇的特点 | 第11-12页 |
| 1.1.2 果蝇的应用 | 第12页 |
| 1.2 cDNA文库的介绍 | 第12-16页 |
| 1.2.1 cDNA文库的原理 | 第12-13页 |
| 1.2.2 cDNA文库的特点 | 第13页 |
| 1.2.3 cDNA文库的应用 | 第13-14页 |
| 1.2.4 cDNA文库的质量鉴定 | 第14页 |
| 1.2.5 cDNA文库的类型 | 第14-16页 |
| 1.3 酵母双杂交系统 | 第16-20页 |
| 1.3.1 酵母双杂交系统的原理 | 第17-18页 |
| 1.3.2 酵母双杂交系统的应用 | 第18页 |
| 1.3.3 酵母双杂交系统的优点 | 第18-19页 |
| 1.3.4 酵母双杂交系统的局限性 | 第19页 |
| 1.3.5 酵母双杂交系统的发展 | 第19-20页 |
| 1.4 本实验内容 | 第20-25页 |
| 1.4.1 SMART技术 | 第20-21页 |
| 1.4.2 实验使用菌株 | 第21-22页 |
| 1.4.3 实验使用质粒 | 第22-23页 |
| 1.4.4 文库的鉴定及菌落PCR | 第23-25页 |
| 第2章 材料与方法 | 第25-37页 |
| 2.1 实验材料与试剂 | 第25-27页 |
| 2.1.1 实验试剂与试剂盒 | 第25页 |
| 2.1.2 主要试剂和培养基的配置 | 第25-27页 |
| 2.2 野生型果蝇w~(1118)酵母双杂交cDNA文库的构建 | 第27-33页 |
| 2.2.1 设计接头和引物 | 第27-28页 |
| 2.2.2 总RNA的提取 | 第28页 |
| 2.2.3 合成第一链cDNA | 第28-29页 |
| 2.2.4 合成及纯化ds cDNA | 第29页 |
| 2.2.5 构建载体pGADT7-Rec | 第29-30页 |
| 2.2.6 制备SmaI线性化载体pGADT7-Rec | 第30-31页 |
| 2.2.7 酵母菌Y187感受态细胞的制备 | 第31页 |
| 2.2.8 转化酵母菌Y187 | 第31-32页 |
| 2.2.9 鉴定文库多态性 | 第32页 |
| 2.2.10 鉴定文库多态性 | 第32-33页 |
| 2.2.11 收集转化子 | 第33页 |
| 2.2.12 测定文库效价 | 第33页 |
| 2.3 诱饵载体pGBKT7-CG2056的构建 | 第33-35页 |
| 2.3.1 设计引物 | 第33-34页 |
| 2.3.2 cDNA的合成 | 第34页 |
| 2.3.3 构建CG2056-T | 第34-35页 |
| 2.3.4 双酶切载体pGBKT7和CG2056-T | 第35页 |
| 2.3.5 构建载体pGBKT7-CG2056 | 第35页 |
| 2.4 诱饵载体pGBKT7-CG2056自激活及毒性检测 | 第35-37页 |
| 2.4.1 酵母菌AH109活化 | 第35-36页 |
| 2.4.2 酵母菌AH109感受态的制备 | 第36页 |
| 2.4.3 转化酵母菌AH109 | 第36页 |
| 2.4.4 自激活检验 | 第36-37页 |
| 第3章 结果与讨论 | 第37-43页 |
| 3.1 野生型果蝇w~(1118)酵母双杂交cDNA文库的构建 | 第37-40页 |
| 3.1.1 野生型果蝇w~(1118)总RNA的提取结果 | 第37页 |
| 3.1.2 野生型果蝇w~(1118)双链cDNA的电泳检测 | 第37-38页 |
| 3.1.3 线性化载体pGADT7-Rec的构建 | 第38-39页 |
| 3.1.4 cDNA文库容量和多态性鉴定 | 第39-40页 |
| 3.1.5 文库效价测定 | 第40页 |
| 3.2 诱饵载体pGBKT7-CG2056的构建 | 第40-42页 |
| 3.2.1 质粒CG2056-T的构建 | 第40-41页 |
| 3.2.2 诱饵载体pGBKT7-CG2056抽提结果 | 第41-42页 |
| 3.3 酵母菌AH109转化及自激活鉴定 | 第42-43页 |
| 结论 | 第43-45页 |
| 参考文献 | 第45-50页 |
| 致谢 | 第50页 |
